역전사 중합효소 연쇄반응

Reverse transcription polymerase chain reaction
「RT-PCR」는 여기서 리다이렉트 됩니다.정량적 실시간 중합효소 연쇄 반응(qPCR) 또는 운동성 중합효소 연쇄 반응이라고도 하는 실시간 중합효소 연쇄 반응은 실시간 중합효소 연쇄 반응을 참조하십시오.
RT-PCR

역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR)은 DNA로의 RNA 역전사와 중합효소 연쇄반응(PCR)[1]을 이용한 특정 DNA 표적의 증폭을 결합한 실험실 기술이다.이것은 주로 특정 RNA의 양을 측정하는 데 사용됩니다.이것은 실시간 PCR 또는 정량 PCR(qPCR)이라고 불리는 기술인 형광을 사용하여 증폭 반응을 모니터링함으로써 달성된다.복합 RT-PCR과 qPCR은 연구 및 임상 환경에서 유전자 발현 분석 및 바이러스 RNA 정량화에 일상적으로 사용된다.

RT-PCR과 qPCR의 밀접한 관련성에 의해 RT-PCR을 의미하는 메타니메이션 용어가 사용되고 있습니다.RT-PCR은 예를 들어 RNA의 분자 복제, 배열 또는 단순한 검출을 가능하게 하기 위해 RT-PCR 없이 사용될 수 있기 때문에 이러한 [2]용도는 혼동될 수 있다. 반대로 qPCR은 예를 들어 DNA의 특정 조각의 복사 번호를 정량화하기 위해 RT-PCR 없이 사용될 수 있다.

명명법

RT-PCR과 qPCR의 조합은 정량적[3] RT-PCR 또는 실시간 RT-PCR[4](정량적 실시간 RT-PCR이라고도[5] 함)이라고 불리며, qRT-PCR,[6] RRT-PCR,[7] RRT-PCR 및 [8]RRT-PCR로 다양하게 축약되어 있습니다.혼란을 피하기 위해 이 문서 전체에서 다음 약어가 일관되게 사용됩니다.

기술. 줄임말
중합효소 연쇄반응 PCR
역전사 중합효소 연쇄반응 RT-PCR
실시간 중합효소 연쇄반응 qPCR
RT-PCR/qPCR 복합 기술 qRT-PCR

모든 저자(특히 이전 저자)가 이 규칙을 사용하는 것은 아니며, 링크를 따라갈 때 주의해야 합니다.RT-PCR은 Real-Time PCR(qPCR; 실시간 PCR)과 Reverse Transcription PCR(RT-PCR; 역문자 변환 PCR)을 모두 나타내기 위해 사용되고 있습니다.

역사

1977년 도입된 이후 노던블롯은 (a) 시간이 많이 걸리는 기술, (b) 검출을 위해 많은 양의 RNA가 필요하고 (c) RNA [10][11]함량이 적은 양적으로 부정확하다는 단점에도 불구하고 RNA 정량화에 광범위하게 사용되어 왔다.그러나 1983년 Kary Mullis에 의해 PCR이 발명된 이후 RT PCR은 RNA 검출 및 [12]정량화를 위한 선택 방법으로서 Northern Blot을 대체했다.

RT-PCR은 몇 가지 이유로 RNA 수준의 검출 및/또는 비교를 위한 벤치마크 기술이 되었다. (a) PCR 후 처리를 필요로 하지 않으며, (b) 광범위한 RNA 농도를 측정할 수 있으며(>10배7), (c) 질적 [5]및 정량적 데이터 모두에 대한 통찰력을 제공한다.RT-PCR은 단순성, 특이성 및 민감성으로 인해 와인 내 효모세포의 정량화와 같은 단순한 실험부터 조류독감 바이러스 및 SARS-CoV-2 등의 [13][14][15]감염원 검출을 위한 진단도구로서 보다 복잡한 용도에 이르기까지 광범위한 응용에 사용된다.

원칙

RT-PCR에서 RNA 템플릿은 먼저 역전사효소(RT)를 사용하여 상보적 DNA(cDNA)로 변환된다.그런 다음 cDNA는 PCR을 사용하여 지수 증폭을 위한 템플릿으로 사용됩니다.RNA 전사 검출을 위한 RT-PCR의 사용은 다음과 같은 중요한 방법으로 유전자 발현 연구에 혁명을 가져왔다.

  • 이론적으로 어떤[16] 유전자의 전사를 검출하는 것이 가능했다.
  • 시료 증폭이 가능하여[17][18] Northern Blot 분석 시 풍부한 시작 재료가 필요하지 않음
  • 프라이머를 가로지르는 RNA가 손상되지[17] 않는 한 RNA 열화에 대한 내성을 제공

원스텝 RT-PCR과2스텝 RT-PCR

원스텝 RT-PCR과 2스텝 RT-PCR

RT-PCR을 사용한 mRNA의 정량화는 1단계 또는 2단계 반응으로 달성될 수 있다.두 접근법의 차이는 절차를 수행할 때 사용되는 튜브의 수에 있습니다.2단계 반응을 위해서는 역전사효소 반응과 PCR 증폭을 별도의 튜브에서 수행해야 합니다.2단계 접근법의 단점은 샘플 [19]취급 빈도가 높아짐에 따라 오염되기 쉽다는 것입니다.한편, cDNA 합성부터 PCR 증폭까지의 모든 반응은 원스텝 접근법에서 단일 튜브에서 발생한다.원스텝 접근법은 단일 환경에서 모든 효소 반응을 포함시킴으로써 실험적인 변화를 최소화하는 것으로 생각된다.노동 집약적이고 오염되기 쉬운 cDNA 제품을 PCR 반응으로 피펫팅하는 단계를 제거합니다.억제제 내성 중합효소인 최적화된 1단계 RT-PCR 조건을 가진 중합효소 강화제의 추가 사용은 전혈 [20][21]및 혈청과 같은 정제되지 않은 또는 조잡한 샘플에서 RNA의 역전사를 지원합니다.그러나 시작 RNA 템플릿은 원스텝 접근법에서 분해되기 쉬우며, 동일한 검체의 반복 측정이 필요한 경우에는 이 접근 방식을 사용하지 않는 것이 좋습니다.또한 1단계 접근법은 2단계 접근법에 비해 정확도가 낮은 것으로 보고되었다.용융온도의 간단한 변화를 통해 프라이머-다이머를 제거할 수 있기 때문에 SYBR Green과 같은 DNA 결합 염료를 사용할 때 선호하는 분석 방법이기도 하다.그럼에도 불구하고 원스텝 어프로치는 [citation needed]바이오센싱에서 직접 표적 RNA를 신속하게 검출할 수 있는 비교적 편리한 솔루션입니다.

엔드포인트 RT-PCR과 실시간 RT-PCR의 비교

RT-PCR 제품의 정량화는 크게 엔드포인트와 실시간의 [22]2가지 카테고리로 나눌 수 있습니다.소수의 샘플에서 유전자 발현 변화를 측정하기 위해서는 엔드포인트 RT-PCR을 사용하는 것이 선호되지만 실시간 RT-PCR은 어레이 분석 또는 유전자 발현 변화로부터 얻은 정량적 결과를 전 세계적으로 [23]검증하는 금색 표준 방법이 되었다.

엔드포인트 RT-PCR

엔드포인트 RT-PCR의 측정 접근방식은 브롬화 에티듐과 같은 형광 염료 사용,[24][25] 형광 이미저를 사용한 PCR 제품의 [26]P32 라벨링 또는 섬광 [18]카운팅을 통해 유전자 발현 수준을 검출해야 한다.엔드포인트 RT-PCR은 일반적으로 상대, 경쟁, [27][28]비교의 3가지 방법을 사용하여 달성됩니다.

상대 RT-PCR
RT-PCR의 상대적인 정량화는 관심 유전자와 동시에 내부 대조군의 공증폭을 포함한다.내부 제어는 검체를 정규화하는 데 사용됩니다.정규화되면 mRNA의 여러 샘플에 걸쳐 상대적인 전사량 함량을 직접 비교할 수 있다.주의해야 할 한 가지 주의사항은 실험 치료의 영향을 받지 않도록 내부 통제를 선택해야 한다는 것입니다.결과가 정확하고 의미 있게 나오려면 발현 수준이 모든 검체 및 관심 mRNA에 대해 일정해야 합니다.결과의 정량화는 목표물의 선형 범위와 제어 증폭을 비교하여 분석하기 때문에 분석을 시작하기 전에 시작 표적 분자 농도와 그 증폭률을 고려하는 것이 중요하다.분석 결과는 유전자 신호 대 내부 대조군 신호의 비율로 표현되며, 이 값은 상대 표적 RNA [25][28][29]발현 추정에서 샘플 간의 비교에 사용될 수 있습니다.
경쟁제품의 RT-PCR
절대 정량에는 경쟁 RT-PCR 기술이 사용된다.그것은 크기나 배열의 작은 차이로 표적 RNA와 구별할 수 있는 합성 "경쟁자" RNA의 사용을 포함한다.합성 RNA의 설계는 시퀀스가 동일하지만 정확한 결과를 위해 목표 RNA보다 약간 짧습니다.설계 및 합성된 경쟁 RNA의 알려진 양은 실험 샘플에 추가되고 RT-PCR을 사용하여 표적과 함께 증폭됩니다.다음으로 경쟁 RNA의 농도 곡선을 생성하여 내인성 전사물로부터 생성된 RT-PCR 신호를 비교하여 [28][30]시료에 존재하는 목표물의 양을 결정한다.
비교 RT-PCR
비교 RT-PCR은 표적 RNA가 관련이 없는 배열의 내부 표준과 단일 반응 내에서 증폭 시약을 놓고 경쟁한다는 점에서 경쟁 RT-PCR과 유사하다.반응이 완료되면 결과를 외부 표준 곡선과 비교하여 표적 RNA 농도를 결정합니다.상대적이고 경쟁적인 정량 방법과 비교하여 비교 RT-PCR은 조사자가 파일럿 실험을 수행할 필요가 없기 때문에 보다 사용하기 편리한 방법으로 간주됩니다. 상대 RT-PCR에서 mRNA의 지수 증폭 범위는 사전에 결정되어야 하며 경쟁 RT-PCR인 합성 RT-PCR에서 결정되어야 합니다.페티토르 RNA는 [28][31][32][33][34]합성되어야 한다.

실시간 RT-PCR

지난 몇 년 동안 새로운 형광 DNA 라벨링 기법의 등장으로 PCR 제품의 실시간 분석과 검출이 가능해졌고, 결과적으로 유전자 발현 분석을 위한 실시간 RT-PCR의 광범위한 채택으로 이어졌다.실시간 RT-PCR은 현재 유전자 발현 정량화의 선택 방법일 뿐만 아니라 전 세계적으로 어레이 분석과 유전자 발현으로부터 결과를 얻는 데 선호되는 방법이다.현재 PCR 제품의 실시간 RT-PCR 검출에는 SYBR Green, TaqMan, 분자 비콘 및 스콜피온 프로브의 4가지 형광 DNA 프로브를 사용할 수 있습니다.이들 프로브는 모두 형광신호를 발생시켜 PCR 제품을 검출할 수 있다.SYBR 그린 색소는 단순히 용액 중 이중가닥 DNA에 결합함으로써 형광신호를 방출하는 반면 TaqMan 프로브', 분자 비콘 및 전갈의 형광생성은 염료 분자의 Förster Ronance Energy Transfer(FRET) 결합과 올리고뉴클레오티드 [35]기질에 대한 퀀처 부분에 의존한다.

SYBR 그린
SYBR Green이 PCR 제품의 이중 가닥 DNA에 결합하면 들뜸 시 빛을 방출합니다.PCR 제품이 축적됨에 따라 형광의 강도가 높아집니다.이 기술은 바인딩의 특수성이 부족하기 때문에 프로브 설계가 필요하지 않기 때문에 사용하기 쉽습니다.단, 이 염료는 PCR 제품 및 프라이머 다이머 제품에서 이중사슬 DNA를 구별하지 않기 때문에 목표 농도의 과대평가는 일반적인 문제이다.정확한 정량화가 절대적으로 필요한 경우 결과 검증을 위한 추가 검사를 수행해야 합니다.그러나 실시간 RT-PCR 제품 검출 방법 중 SYBR Green이 가장 경제적이고 사용하기 [22][23]쉽습니다.
Taqman 프로브
TaqMan 프로브
TaqMan 프로브는 형광 프로브가 5' 끝에 부착되고 퀀처가 3' 끝에 부착된 올리고뉴클레오티드이다.PCR 증폭 중에 이러한 프로브는 앰프리콘에 위치한 표적 배열로 교배되며, 중합효소가 TaqMan 결합으로 템플릿을 복제하므로 중합효소 5'-핵산가수분해효소 활성으로 인해 형광 프로브를 분해하기도 한다.담금질 분자와 형광 탐침의 근접은 보통 FLET를 통해 형광을 검출하는 것을 방해하기 때문에 디커플링은 탐침의 절단 횟수에 비례하여 형광 강도를 증가시킨다.잘 설계된 TaqMan 프로브는 정확한 실시간 RT-PCR 결과를 생성하지만 분석된 [22][16][36]각 mRNA 타겟에 대해 별도의 프로브를 만들어야 하는 경우 합성하는 데 비용과 시간이 많이 소요됩니다.또한 이러한 프로브는 빛에 민감하므로 열화를 방지하기 위해 알쿼트로 신중하게 냉동해야 합니다.
분자 비콘 프로브
TaqMan 프로브와 마찬가지로 분자 비콘도 5' 끝에 부착된 형광 프로브와 올리고뉴클레오티드 기판의 3' 끝에 부착된 퀀처를 이용한 FRET 검출을 이용한다.그러나 TaqMan 형광 탐침은 증폭 중에 절단되는 반면, 분자 비콘 탐침은 그대로 유지되며 각 반응 주기 동안 새로운 표적에 다시 결합됩니다.용액이 유리할 경우 형광 탐침과 담금질 분자가 근접하여 FLET를 통한 형광을 방지한다.그러나 분자 비콘 프로브가 표적에 교배할 때 형광 염료와 담금질을 분리하여 들뜸 시 빛을 방출한다.TaqMan 프로브와 마찬가지로 분자 비콘은 합성하는 데 비용이 많이 들고 각 RNA [19]표적에 대해 별도의 프로브가 필요합니다.
스콜피온 탐사선
스콜피온 탐침은 분자 비콘과 마찬가지로 5' 끝의 형광 탐침이 올리고뉴클레오티드의 3' 끝 부분에 의해 담금질되기 때문에 다시 잡종되지 않은 상태에서 형광 활동을 하지 않을 것입니다.그러나 스콜피온의 경우, 3' 끝에는 5' 끝 프라이머의 확장곱을 보완하는 배열도 포함되어 있다.스콜피온 확장이 앰플리콘의 보체에 결합하면 스콜피온 구조가 열리고 FLET가 방지되며 형광 신호를 [37]측정할 수 있습니다.
다중 프로브
TaqMan 프로브, 분자 비콘 및 전갈을 사용하면 단일 튜브에서 PCR 제품을 동시에 측정할 수 있습니다.이것은 각각의 다른 형광 염료가 특정 방출 스펙트럼과 연관될 수 있기 때문에 가능하다.멀티플렉스 프로브를 사용하면 테스트 효용성을 해치지 않고 시간과 노력을 절약할 수 있을 뿐만 아니라 유전자 삭제 분석, 돌연변이 및 다형성 분석, 정량 분석, RNA 검출 등 광범위한 연구 분야에 응용할 수 있어 다양한 [37][38][39]분야의 실험실에서 매우 귀중한 기술이 됩니다.

실시간 RT-PCR로 얻은 결과를 정량화하기 위해 표준 곡선 방법과 비교 임계값 방법이라는 [40]두 가지 전략이 일반적으로 사용된다.

어플

역전사 중합효소 연쇄반응을 통한 지수증폭은 매우 적은 수의 RNA 분자가 검출될 수 있는 매우 민감한 기술을 제공합니다.RT-PCR은 유전자 발현의 척도로서 유전질환의 진단 및 반정량적으로 세포 또는 조직 내의 특정 다른 RNA 분자의 풍부성 결정에 널리 사용된다.

조사 방법

RT-PCR은 유전자 발현을 측정하는 연구 방법에 일반적으로 사용된다.예를 들어 Lin 등입니다.효모세포에서 Gal 유전자의 발현을 측정하기 위해 qRT-PCR을 사용했다.첫째, 린 등.Gal 유전자 조절에 관여하는 것으로 의심되는 단백질의 돌연변이를 조작했습니다.이 돌연변이는 Gal 발현을 선택적으로 폐지하기 위해 가설화 되었다.이를 확인하기 위해 이 돌연변이를 포함하는 효모세포의 유전자 발현 수준을 qRT-PCR로 분석하였다.연구진은 이 조절 단백질의 돌연변이가 Gal 발현을 [41]감소시켰다는 것을 결론적으로 밝혀낼 수 있었다.노던 블롯 분석은 RNA의 유전자 발현을 더 연구하기 위해 사용된다.

유전자 삽입

RT-PCR은 또한 진핵생물 유전자를 원핵생물에 삽입하는데 매우 유용할 수 있다.대부분의 진핵생물 유전자는 게놈에 존재하지만 성숙한 mRNA에는 존재하지 않는 인트론을 포함하고 있기 때문에, RT-PCR 반응에서 생성된 cDNA는 전사 후 단백질로 직접 번역되는 정확한 DNA 배열이다.이러한 유전자들이 단백질 생산이나 정화를 위해 원핵세포에서 발현될 때, 전사로부터 직접 생성된 RNA는 엑손만을 포함하고 있기 때문에 스플라이싱을 거치지 않아도 된다.

유전병 진단

RT-PCR은 Lesch-Nyhan 증후군과 같은 유전병을 진단하는 데 사용될 수 있다.이 유전질환은 HPRT1 유전자의 기능 이상에 의해 발생하는데, 이는 임상적으로 치명적인 요산 요로결석과 통풍과 유사한 증상을 초래한다.[6][clarification needed] HPRT1의 mRNA 발현 수준에 대해 임산부와 태아를 분석하면 산모가 보균자인지, 태아가 레쉬-니한 [42]증후군에 걸릴 가능성이 있는지 여부를 알 수 있다.

암 검출

과학자들은 예후를 개선하고 치료에 대한 반응을 감시하기 위해 암 검출에 RT-PCR을 사용하는 방법을 연구하고 있다.순환하는 종양 세포는 암의 종류에 따라 독특한 mRNA를 생성한다.목표는 어떤 mRNA 전사물이 특정 암세포 유형에 가장 적합한 바이오마커 역할을 하는지 확인한 후 RT-PCR로 [43]발현 수준을 분석하는 것이다.

RT-PCR은 인플루엔자 바이러스 A, HIV,[44] 사스-CoV-2와 같은 레트로바이러스로 구성된 게놈을 연구하는 데 흔히 사용된다.

과제들

RT-PCR의 주요 장점에도 불구하고 단점이 없는 것은 아닙니다.PCR의 다중 사이클 동안 역전사 보완 DNA(cDNA)의 기하급수적 성장은 선형성 [45]유지의 어려움 때문에 부정확한 끝점 정량화를 생성한다.샘플에서 RNA 함량의 정확한 검출 및 정량화를 제공하기 위해 qRT-PCR은 PCR의 각 사이클 동안 증폭 생성물을 모니터링하는 형광 기반 변형을 사용하여 개발되었습니다.아주 작은 DNA 오염도 바람직하지 않은 [46]결과를 초래할 수 있기 때문에 이 기술의 극단적인 민감도는 양날의 검이 될 수 있다.잘못된 양성 결과를 제거하는 간단한 방법은 유전자 특이 프라이머의 [47]5' 영역에 앵커 또는 태그를 포함하는 것이다.또한 템플릿 농도 및 증폭 [31]효율성을 포함한 수많은 변동원이 존재하기 때문에 정량화 연구의 계획 및 설계는 기술적으로 어려울 수 있다.이미 알려진 양의 RNA를 시료에 스파이크하고, 표준 곡선을 생성하는 일련의 RNA 희석을 추가하고, 템플릿 복사 시료(cDNA 없음)를 콘트롤로 사용할 수 있다.

프로토콜

RT-PCR은 원스텝 RT-PCR 프로토콜 또는 2스텝 RT-PCR 프로토콜로 실행할 수 있습니다.

원스텝 RT-PCR

원스텝 RT-PCR은 mRNA 표적(최대 6kb)을 역전사시킨 후 단일 시험관에서 PCR 증폭을 실시한다.손상되지 않은 고품질 RNA와 배열별 프라이머를 사용하면 최상의 결과를 얻을 수 있습니다.

역전사효소, Taq DNA 중합효소 및 교정 중합효소의 혼합을 포함한 원스텝 RT-PCR 키트를 선택하고 필요한 모든 재료 및 기기를 얻으면 반응 혼합물을 조제한다.반응 혼합물은 dNTP, 프라이머, 템플릿 RNA, 필요한 효소 및 완충액을 포함합니다.반응 혼합물은 각 반응마다 PCR 튜브에 첨가되고 이어서 템플릿 RNA가 첨가됩니다.그런 다음 PCR 튜브를 서멀 사이클러에 넣어 사이클링을 시작합니다.첫 번째 사이클에서는 cDNA 합성이 일어난다.두 번째 주기는 역전사 효소가 비활성화되는 초기 변성입니다.나머지 40~50 사이클은 변성, 아닐 및 신장을 포함한 증폭입니다.증폭이 완료되면 겔 전기영동으로 [48][49]RT-PCR 제품을 분석할 수 있습니다.

(PCR 출원 매뉴얼 및 바이오툴)

2단계 RT-PCR

2단계 RT-PCR은 이름에서 알 수 있듯이 2단계로 이루어집니다.먼저 역문자 변환 후 PCR입니다.이 방법은 원스텝 방식보다 더 민감합니다.키트는 2단계 RT-PCR에도 도움이 됩니다.원스텝 PCR과 마찬가지로 최상의 결과를 얻으려면 손상되지 않은 고품질 RNA만 사용하십시오.2단계 PCR의 프라이머는 시퀀스 고유할 필요가 없습니다.

순서 1

먼저 PCR 튜브에 템플릿 RNA, 프라이머, dNTP 혼합물 및 핵산가수분해효소 미사용 물을 결합합니다.PCR tube에 RNase 억제제와 역전사효소를 첨가한다.다음으로 역전사효소의 아닐, 신장 및 비활성화가 발생하는 1사이클 동안 PCR 튜브를 서멀 사이클러에 넣는다.마지막으로 PCR인 2단계로 직접 진행하거나 PCR이 실행될 때까지 제품을 얼음에 보관합니다.

순서 2

완충제, dNTP 혼합물, MgCl2, Taq 중합효소 및 핵산가수분해효소 미사용 물을 포함한 마스터 혼합물을 각 PCR 튜브에 추가합니다.그런 다음 튜브에 필요한 프라이머를 추가합니다.다음으로 PCR 튜브를 서멀 사이클러에 넣어 30 사이클의 증폭 프로그램을 실시합니다.여기에는 변성, 어닐링 및 연신 등이 포함됩니다.RT-PCR 제품은 [50]겔 전기영동으로 분석할 수 있습니다.

출판 가이드라인

정량적 RT-PCR 분석은 샘플에서 특정 cDNA 표적의 복사본 수를 측정하기 위한 황금 표준으로 간주되지만, 제대로 [51]표준화되지 않았습니다.그 결과, 이 기법을 이용한 수많은 출판물이 있지만, 많은 출판물은 부적절한 실험 세부사항을 제공하고 부적절한 데이터 분석을 사용하여 부적절한 결론을 도출한다.정량적 PCR 데이터의 품질에 내재된 가변성으로 인해 검토자는 이러한 원고를 평가하는 데 어려움을 겪을 뿐만 아니라 연구를 [52]복제하는 것도 불가능해진다.실험 조건 보고의 표준화의 필요성을 인식하여, MIQE(Minimum Information for Publicative Real-Time PCR Experiments, mikee로 발음) 지침은 국제 학술 과학자 컨소시엄에 의해 발행되었다.MIQE 지침은 더 나은 실험 관행을 장려하고 정량적 PCR [53]데이터의 관련성, 정확도, 정확한 해석 및 반복성을 보장하기 위해 출판에 필요한 정량적 PCR 실험 평가에 필요한 최소 정보를 설명한다.

보고 지침 외에도, MIQE는 혼란을 피하기 위해 정량적 PCR과 관련된 명명법을 표준화할 필요가 있다고 강조한다. 예를 들어, qPCR은 정량적 실시간 PCR에 사용되어야 하는 반면, RT-QPCR은 역전사-QPCR에 사용되어야 하며, 유전자는 표준화를 위해 사용해야 한다.하우스키핑 유전자 대신 ce 유전자.또한 TaqMan 프로브와 같이 상업적으로 파생된 용어를 사용하지 말고 가수분해 프로브라고 지칭해야 한다고 제안합니다.또한 정량화에 사용되는 PCR 사이클(Ct), 교차점(Cp) 및 이륙점(TOP) 대신 정량화 사이클(Cq)을 사용할 것을 제안한다. 이 사이클은 동일한 값을 참조하지만 실시간 계측기의 [51]다른 제조업체에 의해 작성되었다.

가이드라인은 1) 실험설계, 2) 시료, 3) 핵산 추출, 4) 역전사, 5) qPCR 표적 정보, 6) 올리고뉴클레오티드, 7) 프로토콜, 8) 유효성 검사, 9) 데이터 분석 등의 요소로 구성되어 있다.각 요소 내의 특정 항목에는 E(필수) 또는 D(바람직)의 라벨이 붙어 있습니다.E라벨로 표시된 것은 중요하고 필수적인 것으로 간주되며, D라벨로 표시된 것은 말초적이지만 베스트 [53]프랙티스에 중요한 것으로 간주됩니다.

레퍼런스

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