Pfu DNA중합효소
Pfu DNA polymerase| Pfu DNA중합효소 | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 식별자 | |||||||
| 유기체 | |||||||
| 기호. | 폴 | ||||||
| PDB | 4Ahc | ||||||
| 유니프로트 | P61875 | ||||||
| |||||||
Pfu DNA 중합효소는 세포 분열 중에 유기체의 DNA를 복제하는 기능을 하는 고열성 고세균 Pyrococcus furiosus에서 발견되는 효소이다.실험실 환경에서 Pfu는 중합효소 연쇄반응(PCR)에서 DNA를 증폭하는데 사용되며, 여기서 효소는 각 신장공정에서 새로운 DNA 가닥을 복사하는 중심 기능을 한다.
그것은 B족 DNA 중합효소이다.DNA 중합효소 [1]II와 같은 B족 중합효소인 RNase H-like 3'-5' 엑소핵산가수분해효소 도메인을 가지고 있다.
Pfu 중합효소 교정능력
Pfu DNA 중합효소는 Taq DNA 중합효소보다 내열성과 교정성이 뛰어나다.Taq DNA 중합효소와는 달리 Pfu DNA 중합효소는 3~5' 엑소핵산가수분해효소 교정 활성을 가지며, 이는 DNA가 5' 말단에서 3' 말단으로 조립됨에 따라 성장 DNA 가닥의 3' 말단에서 잘못 삽입된 뉴클레오티드를 즉시 제거하는 것을 의미한다.따라서 Pfu DNA 중합효소 생성 PCR 단편은 Taq 생성 PCR 삽입물보다 오류가 적다.
일반적으로 시판되는 Pfu는 130만 개의 염기쌍 중 1개의 오류율을 나타내며 PCR을 사용하여 1kb fragment를 증폭할 경우 2.6%의 변이 생성물을 생성할 수 있습니다.그러나 Pfu는 속도가 느리고 72°C에서 1kb의 DNA를 증폭하는 데 사이클당 1~2분이 필요하다.PCR 반응에서 Pfu DNA 중합효소를 사용하면 무딘 PCR [2]생성물이 생성된다.
따라서 Pfu DNA 중합효소는 높은 충실도의 DNA 합성을 필요로 하는 기술에서는 Taq DNA 중합효소보다 우수하지만 Taq 중합효소와 함께 사용하여 Pfu의 충실도와 Taq 중합효소 [3]활성 속도를 얻을 수도 있다.
역사
캘리포니아 라호야 소재 생명공학 회사 스트라타겐의 에릭 마투르가 이끄는 과학자들은 1991년 [4]Taq DNA 중합효소보다 복제의 충실도가 현저히 높은 Pfu DNA 중합효소를 발견했다.1996년 [5]핵산가수분해효소 결핍 Pfu와 풀 Pfu 특허를 취득했다.
균주 GB-D 및 Pwo DNA 중합효소의 "Deep Vent"(Q51334)와 같은 파이로코커스 균주의 다른 중합효소도 사용되었습니다.[3]
레퍼런스
- ^ InterPro 단백질 뷰: P61875
- ^ Agilent Technologies. "PfuTurbo DNA Polymerase Instruction Manual #600250" (PDF).
- ^ a b van Pelt-Verkuil E, van Belkum A, Hays JP (2008). "Taq and Other Thermostable DNA Polymerases". Principles and Technical Aspects of PCR Amplification. pp. 103–18. doi:10.1007/978-1-4020-6241-4_7. ISBN 978-1-4020-6240-7.
- ^ Lundberg KS, Shoemaker DD, Adams MW, Short JM, Sorge JA, Mathur EJ (December 1991). "High-fidelity amplification using a thermostable DNA polymerase isolated from Pyrococcus furiosus". Gene. 108 (1): 1–6. doi:10.1016/0378-1119(91)90480-y. PMID 1761218.
- ^ 미국 특허 5,489,523, 미국 특허 5,545,552
