클레노우 파편

클레노 파편은 대장균에서 추출한 DNA 중합효소 I가 단백질 분해효소 소분해효소(Protease subilisin)에 의해 효소 분해될 때 생성되는 큰 단백질 파편이다.1970년에 처음 보고된 것으로서,^[1] 5' → 3' 중합효소 활동과 3' 중합효소 제거 및 교정을 위한 3' → 5' exonuclease 활동은 유지되지만, 5' → 3' exonuclease 활동은 상실된다.

대장균의 DNA 중합효소 I가 미분해될 때 형성된 다른 작은 조각은 5' → 3' exonuclease 활성을 유지하지만 클레노우 조각에 의해 다른 2가지 활동(즉, 5' → 3' polyerase 활성과 3' exonuclease 활성을 나타내지 않는다.

리서치

대장균에서 추출한 DNA 중합효소 I의 5' → 3' 엑소뉴클레아제 활성이 많은 용도에 부적합하기 때문에 이 활동이 부족한 클레노우 파편은 연구에 매우 유용할 수 있다.클레노우 파편은 다음과 같은 연구 기반 작업에 매우 유용하다.

• 단일 가닥 템플릿에서 이중 가닥 DNA 합성
• 5' 오버행(overhang)을 뭉툭하게 만들기 위해 3'의 DNA 조각 끝부분을 채우는 것
• 돌출된 3' 오버행(overhang)을 소화
• 방사성 DNA 탐사 준비

클레노우 파편은 또한 Taq 중합효소와 같은 자동온도조절 효소로 대체되기 전에 중합효소 연쇄반응(PCR) 공정에서 DNA의 일부를 크게 증폭시키는데 사용되는 원래의 효소였다.^[2][3]

엑소 클레노우 파편

E.coli에서 DNA 중합효소 I의 5' → 3' exonuclease 활성화가 바람직하지 않을 수 있듯이, 클레노우 파편의 3' → 5' exonuclease 활성도 특정 용도에 바람직하지 않을 수 있다.이 문제는 클레노우를 암호화하는 유전자에 돌연변이를 도입함으로써 극복할 수 있다.이로 인해 효소가 발현되어 5' → 3' 중합효소 활성은 유지되지만 엑소누실제 활성은 결여된다(5'→3' 또는 3'→5').이 효소의 형태는 엑소 클레노우 파편이라고 불린다.

exo-Klenow 파편은 마이크로 어레이를 위한 일부 형광 라벨링 반응과 DNA 파편에 DNA 어댑터를 연결하는 과정의 중요한 단계인 dA 및 dT 테일링에도 사용되며 Next-Gen 시퀀싱용 DNA 라이브러리를 준비하는 데 자주 사용된다(예: [1] 참조).

참조

외부 링크

• 미국 국립 의학 도서관의 Klenow+Fragment (MesH)
• 다이어그램(vivo.colostate.edu