공동 인자 공학

Cofactor engineering

대사 공학의 일부인 공동 인자 공학은 유기체의 대사 경로에서 공동 인자 사용을 조작하는 것으로 정의된다.공동 인자 공학에서는 대사 유량을 최대화하거나 최소화하기 위해 공동 인자 농도를 변경한다.이러한 유형의 공학은 대사물 제품의 생산을 최적화하거나 대사 네트워크의 효율성을 높이는 데 사용될 수 있다.값싼 원자재로 수익성 있는 화학물질을 만들기 위해 엔지니어링 단세포 유기체의 사용이 증가하고 있으며, 공동 인자 공학은 생산을 극대화하는 데 결정적인 역할을 할 수 있다.이 분야는 지난 10년 동안 더 많은 인기를 얻었고 화학 제조, 생명 공학, 그리고 제약 산업에서 몇 가지 실용적인 응용 분야를 가지고 있다.[1]null

공작용제는 단백질과 결합하는 비단백질 화합물이며 단백질의 정상적인 촉매 기능에 필요하다.공작용제는 생물학적 활동에서 "도움받는 분자"로 간주될 수 있으며, 종종 효소의 기능성에 영향을 준다.공작용제는 유기 화합물과 무기 화합물이 될 수 있다.무기질 공동요인의 예로는 철이나 마그네슘이 있으며, 유기농 공동요인의 예로는 ATP나 코엔자임 A가 있다.유기농 공효소는 코엔자임으로 더 구체적으로 알려져 있으며, 많은 효소들은 대사 반응에서 정상적인 촉매 기능을 가정하기 위해 코엔자임을 첨가해야 한다.코엔자임은 촉매 작용을 촉진하기 위해 효소의 활성 부위와 결합한다.공효소와 공효소를 공학화함으로써, 자연적으로 발생하는 대사 반응을 조절하여 대사 네트워크의 출력을 최적화할 수 있다.[2][3][4]null

공통의 공동 인자 NADH, 최초 발견.

배경

1906년 아서 하든과 윌리엄 영에 의해 공동 인자(Coactors)가 발견되었는데, 이때 끓인 효모 추출물이 첨가되면 끓이지 않은 효모 추출물의 알코올 발효율이 증가한다는 사실을 발견했다.[5]몇 년 후, 한스 폰 오일러-첼핀은 끓인 추출물의 공계수를 NAD로+ 확인했다.ATP와 코엔자임 A와 같은 다른 공작용제는 1900년대 후반에 발견되었다.공동 인자 활동의 메커니즘은 오토 하인리히 워버그가 1936년에 NAD가+ 전자 수용기로 기능한다고 결정했을 때 발견되었다.이러한 초기 발견 후에 과학자들은 공작용제 농도의 조작이 대사 경로의 개선을 위한 도구로 사용될 수 있다는 것을 깨닫기 시작했다.[1]null

유기농 공작용제의 중요한 그룹은 비타민이라고 불리는 분자군이다.예를 들어 비타민 B12(코발라민)는 인체에 결정적인 역할을 하는 반면 그 파생물질인 코엔자임 B12는 우리 몸 안의 모든 세포의 대사물에서 발견된다.그것의 존재는 지방산 합성과 에너지 생산에 참여할 뿐만 아니라 세포 DNA의 합성 및 규제에 영향을 미친다.많은 중요한 대사 경로에 의해 공동 인자(coactor)가 요구되며, 단일 유형의 공동 인자(coactor)의 농도가 많은 다른 경로의 유동성에 영향을 미치는 것은 가능하다.

유기체가 식이요법을 통해 섭취하는 미네랄과 금속 이온은 무기질 공동요인의 대표적인 예를 제공한다.예를 들어 Zn은2+ 이산화탄소와 물을 중탄산염과 양성자로 전환시키기 때문에 탄산 무수효소 효소를 보조하기 위해 필요하다.공작용제 역할을 하는 널리 알려진 광물은 철인데, 적혈구에서 발견되는 산소 운반 단백질인 헤모글로빈의 적절한 기능에 필수적이다.특히 이 사례는 동물의 신진대사에 있어 공작용제의 중요성을 강조한다.null

의의

공동 인자 공학은 대사 경로의 조작에서 중요하다.대사 경로란 유기체에서 일어나는 일련의 화학반응을 말한다.신진대사 공학은 신진대사 경로 내의 유동성을 변화시키는 대상이다.대사공학에서 대사통로는 경로에 관여하는 효소의 기능성을 변화시킴으로써 직접적으로 변화될 수 있다.코팩터 엔지니어링은 대사 경로를 변경하는 데 있어 뚜렷한 접근법과 몇 가지 장점을 제공한다.통로에 사용되는 효소를 바꾸는 대신에, 공효소를 바꿀 수 있다.이것은 공효소의 특정 특성 및 공효소가 어떻게 변형될 수 있기 때문에 대사 엔지니어에게 유리하게 작용할 수 있다.null

신진대사 경로는 신진대사 기술자들이 원하는 제품을 만들기 위해 사용할 수 있다.사용되는 공효소의 종류와 그 공효소가 사용되는 시간을 수정함으로써 대사망의 결과가 달라질 수 있다.제품의 더 큰 생산을 창출하기 위해, 대사 엔지니어들은 특정 공정에서 가장 적합한 공동 인자 중 어떤 것이든 네트워크를 공급할 수 있는 능력을 가지고 있다.이것은 네트워크의 최적화로 이어져 원하는 제품의 높은 생산을 제공한다.또한, 네트워크에 사용되는 공동 요소를 바꾸는 것은 복잡한 문제에 대한 기발한 해결책이 될 수 있다.셀에 존재하지만 종종 사용되지 않는 네트워크는 바람직한 제품을 가질 수 있다.제품을 생산하기 위한 완전히 새로운 일련의 경로를 엔지니어링하는 대신에, 공동 인자 엔지니어링을 적용할 수 있다.세포에서 쉽게 구할 수 있는 공효소를 사용하기 위해 효소를 대체함으로써, 일반적으로 사용되지 않는 네트워크는 더 이상 공효소가 제한되지 않으며, 생산량이 증가할 수 있다.null

대사 네트워크의 수율을 수정하는 것 외에도, 네트워크에 사용되는 공효소를 변경하면 원하는 제품을 만들려고 할 때 운영비를 줄일 수 있다.NADH와 NADPH는 인산염 그룹의 존재에 의해서만 다른 두 가지 매우 흔한 세포 공동 인자다.그러나 이 인산염 그룹은 NADH보다 NADPH를 훨씬 덜 안정화시켜 합성하는데 더 많은 비용이 든다.따라서 NADH는 종종 NADPH와 동일한 작업을 수행하며, 더 저렴하고 더 쉽게 이용할 수 있기 때문에 일부 셀룰러 네트워크인 NADH를 사용해 보는 것이 유리하다.null

도구 및 프로세스

공동 인자 공학은 사카로마이오스 세레비시아, 대장균과 같은 미생물의 조작을 가장 많이 다루며, 따라서 재조합 DNA 기법을 사용해야 한다.이 기법들은 플라스미드라고 불리는 DNA의 작은 원형 부분을 활용하는데, 대장균과 같은 미생물이 도입하고 통합할 수 있다.이러한 플라스미드는 쉽게 통합될 수 있도록 특별히 연구소에 설계되어 있으며, 다양한 단백질, 대사물 및 효소의 발현에 영향을 미친다.예를 들어 특정 플라스미드는 특정 기질에 대한 친화력을 증가시킬 수 있는 효소의 아미노산 염기서열에 변화를 일으킬 수 있다.null

미생물이 자라기 위해서는 매개체가 필요하며 대장균 배양에 흔히 쓰이는 것은 루리아-베르타니(LB) 육수다.이 매체는 종종 포도당으로 보충되며, 종종 최적의 문화 성장을 촉진하도록 설계된 추가 분자를 포함할 것이다.그 후, 사전 배양은 셰이크플라스크에서 재배될 수 있다.이것들은 간단히 플러그로 꽂은 Ellenmeyer 플라스크로 궤도 쉐이커 기계에 남아 있는데, 이것은 매우 높은 RPM으로 회전한다.이 과정은 최적의 성장을 위해 필요한 문화를 환기시킨다.일단 사전 배양액이 준비되면 구체적인 실험에 필요한 플라스미드를 각 배양액에 따로 첨가한 뒤 각 배양액은 생물반응기로 옮겨진다.생물반응기는 문화가 통제된 환경에서 성장할 수 있도록 하는 시스템이다.이것은 도입된 플라스미드를 유일한 독립 변수로 남긴다.필요한 온도, pH, 대사물 농도 및 기타 다양한 환경 요인은 각 배양균에 대해 동일한 성장 조건을 보장하는 바이오 리액터에 의해 유지될 수 있다.null

일단 특정 기간 동안 원자로에서 샘플이 자랄 수 있게 되면, 샘플들을 제거하고 연구하여 의도된 유기체의 변화가 명백한지 여부를 판단할 수 있다.공동 인자 공학은 대사 경로를 가장 많이 다루기 때문에, 이러한 유기체들은 종종 연구되지만 특정 태그가 붙은 형광 대사물을 소개하고 다양한 경로를 통한 진행을 문서화한다.다른 경우에는 아래에 언급된 효모의 에탄올 생산 감소와 같이 결과가 더 명확하고 쉽게 관찰할 수 있다.[3][4]

적용들

효소의 Coactor를 NADPH에서 NADH로 변경

바이오 촉매제는 제약 및 사회가 사용하는 기타 화학 물질에 필요한 치랄 구성 요소를 생산하기 위해 필요하다.그러한 많은 생물 촉매들은 공동 인자로서 NADPH를 요구한다.NADH와 매우 유사한 공동 인자인 NADPH는 NADH보다 더 비싸고 덜 안정적이다. 이러한 이유로 제조업체는 생산라인에서 사용하는 생물촉매체가 NADPH를 NADPH보다 NADH를 받아들이는 것을 선호한다.공동 인자 공학은 최근 NADPH 대신 공동 인자로서 NADH를 선호하기 위해 효소를 바꾸는 데 성공하고 있다.2010년, 한 과학자 그룹이 사카로마이오스 세레비시아에서 발견된 NADPH-선호성 탈수소효소 Gre2p 효소에 대한 공동 인자 공학을 수행했다.Gre2p는 디케톤 2,5헥사네디온 화합물을 치랄 건물 블록(5S)-히드록시-2-헥사논과 (2S,5S)-헥사네디올로 감소시킨다.과학자들은 Asn9(아스파라긴, 위치 9)가 Gre2p의 활동 지점인 중요한 아미노산이라고 판단했다.구체적으로, Asn9는 3'-hydroxyl 그룹과 2'-oxygen 원자 아데닐 리브 몰이에 결합한다.과학자들은 직접 돌연변이 유발 작용을 통해 아스프(아스파르트산)와 글루(글루탐산)를 모두 맞바꾸었다.이러한 변화로 Gre2p는 NADPH에 대한 의존도가 감소하고 NADH에 대한 친화력이 증가하게 되었다.이것은 NADH를 사용할 때 Gre2p 활성도를 증가시켰다.Asn9를 글루로 대체하는 것이 Asn9를 아스프로 바꾸는 것보다 더 큰 효과를 낸다는 관측이 나왔다.asn에는 극성 무충전 사이드 체인이 있고, 아스프와 글루 모두 극성 충전 사이드 체인이 있다.글루의 증가된 효과는 아데닐 리보스 모이에 더 가깝게 만드는 사이드 체인의 여분의 탄소가 원인이다.이를 통해 2-리보스와 3'리보스 수산화물 그룹과 사이드 체인 카복실 그룹 간에 보다 강력한 수소 결합이 가능하다.Asn9가 글루로 대체되었을 때 NADH를 사용하는 동안 반응의 최대 속도는 두 배가 되었다.이러한 결과로, 과학자들은 Gre2p가 NADPH보다 NADH를 선호하도록 설계하는 데 성공했고, 2,5헥사네디온느 감소 속도를 높였다.이를 통해 화학업체들은 최소한 이 특별한 감축에 NADPH 대신 NADH를 사용함으로써 제조원가를 절감할 수 있게 된다.[6]null

네트워크의 공동 요인 기본 설정 변경

공작용제에 대한 효소의 선호도를 바꾸는 다른 예는 NADPH 의존 반응에 대한 NADH 의존 반응을 변경하는 것이다.이 예에서 효소 자체는 변하지 않고, 대신 다른 공효소를 사용하여 동일한 반응을 수행하는 다른 효소를 선택한다.S. 엘롱가투스의 대사 경로에서 효소를 변화시켜 아세틸-CoA로 1부탄올을 만드는 공학적 통로가 만들어졌다.클로스트리디움속은 1-부탄올을 생산하는 것으로 알려져 있어 S. 엘롱가투스 속에 삽입할 수 있는 통로를 제공한다.이 경로는 역 β-oxidation 경로를 사용하여 1-부탄올을 합성한다.새로이 공학적 경로에 관여하는 효소는 NADH 특이적이었으며, 이는 시아노박테리아가 NADH보다 NADPH를 훨씬 더 많이 생산하기 때문에 S. 엘롱가투스 경로를 복제하는 데 문제가 있었다.

그 후, 연구팀은 생물 탐색을 통해 NADPH 또는 NADPH와 NADH를 모두 활용하는 효소를 확인했다.아세트아세틸-CoA 환원효소(PhaB)가 히드록시부티탈수소효소(Hbd)에 적합한 대체효소인 것으로 나타났다.AdHE2를 대체하기 위해 연구원들은 대장균에서 NADP 의존성 알코올 탈수소효소(YqhD)가 경로에 효과적이라는 것을 발견했다.게다가, 연구원들은 AdhE2의 알데히드 탈수소효소 용량을 대체하기 위해 탈수소효소가 필요했다.C. saccharoperbutylacetonicum의 CoA-acyraldhide 탈수소효소(Bldh)가 좋은 슈트로 판명되었다.PhaB, Bldh, YqhD는 각각 Hbd와 AdhE2를 대체하여 NADH 사용에서 NADPH 사용으로 3-ketobutyl-CoA 감소라는 공동 인자 선호도를 변경할 수 있다.그 후 저자들은 S. 엘롱가투스 PCC 7942의 문화에서 서로 다른 유전자를 과도하게 눌러서 (역산화 경로와 효소를 이용하는 NADPH에서 발견되는 효소들 중) 다른 효소의 다양한 조합을 구성했다.이를 위해 효소에 해당하는 유전자를 함유한 플라스미드를 만들어 S.엘롱가이트의 게놈으로 결합했다.효소측정 후 효소를 이용한 NADPH를 발현하는 시아노박테리아 균주는 1-부탄올(29.9mg/L)이 가장 많이 생성돼 NADPH가 구성되지 않은 균주를 4배 이상 초과했다.전체적으로, 1-부탄올은 다른 유기체로부터의 경로를 이용하여 S. 엘롱가투스에서 생산되었다.이 경로는 시아노박테리아에 선호되는 환원 공작용제에 맞추어 수정되었다.[7]null

Example of how Cofactor Engineering can be used to engineer one pathway to influence another.

공동 인자 평형을 이용한 대사물 유동성 수정

공동 인자 공학에서 대사 경로는 특정 경로 또는 별도의 경로에서 생성되는 특정 공효자의 농도를 변경하여 변경된다.예를 들어, 가상 유기체는 A와 B라는 두 개의 임의 경로를 가질 수 있는데, 여기서 A와 B의 일부 효소는 동일한 공분자를 이용할 수 있다.만약 과학자들이 경로 A의 출력을 감소시키길 원한다면, 그들은 먼저 A에 관련된 효소를 직접 엔지니어링하는 것을 고려할 수 있다, 아마도 그것의 기질에 대한 특정 활성 사이트의 친화력을 감소시키기 위해서일 것이다.그러나 A의 효소는 여러 가지 이유로 기술하기가 어렵거나, 같은 효소를 이용하는 일부 제3의 대사 경로 C에 위험하게 영향을 주지 않고서는 기술하기가 불가능한 경우도 있다.과학자들은 별도의 선택사항으로 B의 유속을 증가시킬 수 있는데, 이것은 공학적 조작이 더 쉬울 수 있다.이는 차례로 A가 필요로 하는 공분자를 "타이밍"하여 효소 활성도를 느리게 하여 A의 출력을 감소시킬 수 있다.이것은 공작용제 공학이 어떻게 사용될 수 있는지를 보여주는 하나의 가상적인 사례지만, 과학자들이 대사 경로를 바꾸는 방법으로 공작용제를 사용하는 다른 많은 독특한 사례들이 있다.공작용제 공학의 주요 이점은 과학자들이 그것을 일반적인 신진대사 공학을 통해 공학적 설계가 어려운 신진대사 경로를 성공적으로 바꾸는 데 사용할 수 있다는 것이다.이는 동일한 공효소를 사용하는 개별 경로에서 보다 쉽게 공학적 효소를 대상으로 하여 달성된다.여러 경로에서 다른 효소에 의해 많은 공동 인자(co factor)가 사용되기 때문에, 공동 인자 공학은 현재의 대사 공학의 방법에 대해 효율적이고 비용 효과적인 대안이 될 수 있다.[8]null

참고 항목:위네마킹의 효모

효모는 산소가 없을 때 대사 경로 발효를 통해 에탄올을 효율적으로 생산할 수 있기 때문에 맥주와 와인 산업에서 흔히 사용된다.발효에는 공동 인자 NADH에 의존하는 글리세롤-3-인산탈수소효소(GPDH)가 필요하다.이 경로에는 포도당을 에탄올과 글리세롤로 변환하는 과정이 포함되며, 두 경로 모두 NADH를 공동 계수로 사용한다.과학자들은 사카로마이오스 세레비시아에 길의 에탄올 생산 부분에서 NADH 가용성을 제한함으로써 세포 대사 유량을 에탄올에서 글리세롤 쪽으로 이동시키는 GPDH를 과잉 생산하도록 설계했다.반대 효과는 세포의 별도 경로인 글루타메이트 합성 경로에 영향을 주어 얻어졌다.NADPH에 의존하는 글루타민산탈수소효소의 발현을 불활성화하고, NADH에 의존하는 글루타민합성효소와 글루타민합성효소를 공동요인으로 과표현함으로써 글루타민합성경로에서 공동요인균형이 이동되었다.이 경로는 이제 발효 경로에서 NADH 가용성을 감소시키는 NADPH가 아닌 NADH에 의존한다.이것은 차례로 에탄올 생산을 증가시키고 글리세롤 생산을 감소시킨다.대사 유동성을 조절하는 이 방법은 자동차 산업에서 사용하기 위한 에탄올의 생산 증대가 식품 산업에서의 그것의 가용성을 감소시키는 세계 연료 시장처럼 시각화될 수 있다.본질적으로, 에탄올로 작동하는 더 많은 엔진을 생산하면 높은 과당 옥수수 시럽을 함유하고 있는 가공된 사탕의 소비를 감소시킬 수 있다.이 공작용제 공학은 알코올 음료의 에탄올 농도를 조절할 수 있기 때문에 맥주와 와인 산업에 적용할 수 있다.와인 산업의 발전으로 에탄올 함량이 지속적으로 증가했기 때문에, 특히 와인 제조업자들은 일부 와인의 에탄올 함량을 줄일 수 있는 가능성에 관심을 가질 것이다.[3]null

구연산순환

Coenzyme A(CoA)와 아세틸-CoA는 미생물의 신진대사에서 100개 이상의 서로 다른 반응을 일으키는 Citric Acid Cycle에서 가장 두드러지게 발견된다.최근 실험에서는 CoA 생합성 경로에서 판토텐산 키나아제 효소의 과다 발현과 판토텐산 보충이 CoA와 아세틸-CoA 플럭스의 조절을 모두 허용했다는 것을 보여주었다.이러한 공동 인자 농도 증가는 이소아밀 아세테이트 합성 경로에서 탄소 유량을 증가시켜 이소아밀 아세테이트의 생산 효율을 증가시켰다.Isoamyl 아세테이트는 인공 향료와 인공호흡기의 효과 테스트에 산업적으로 사용된다.이소아밀 아세테이트의 생산과 더불어, 화농산 수소효소 반응 시 CoA 생합성 작용도 각각 인체에 유익한 영향을 미치는 굴복과 리코펜의 생산량 증가를 초래한다.촉매로 사용되는 항복농도의 증가는 구연산 사이클의 속도의 증가로 이어져 결과적으로 개인의 신진대사를 유발할 수 있다.리코펜 농도의 증가는 전립선암의 위험을 감소시키는 것으로 나타났다.공동 공장 엔지니어링의 이러한 업적을 반복하고 이를 성공적으로 산업 실무에 통합함으로써 얻을 수 있는 잠재적 보상은 셀 수 없이 많다.[4][9][10]null

제지

많은 중요한 산업 효소들은 반응을 촉진하기 위해 공작용제를 사용한다.대사경로를 조작하기 위해 공작용제를 사용함으로써 재료비 절감, 생산단계 제거, 생산시간 단축, 오염 감소, 전반적인 생산효율 증대 등이 가능하다.이러한 제조상의 이점들 중 몇 가지를 보여주는 한 가지 사례는 질식나무의 유전공학이다.종이 생산 과정에서 제조 공장은 나무 줄기에 뻣뻣함을 주는 생화학적 화합물인 리진을 분해해야 나머지 생산 과정 내내 사용되는 펄프를 형성할 수 있다.화학적 펄핑 공정은 제조 공장에서 상당한 양의 에너지를 사용해야 하며 값비싸고 독성이 있는 많은 화학 물질도 사용해야 한다.유전자 공학자들 집단은, 공동 인자 공학을 통해, 리닌을 덜 생산하는 유전적으로 우월한 질식나무를 설계했다.이러한 유전자 조작 나무들은 제지 공장에서 그들의 비용, 오염, 제조 시간을 줄일 수 있도록 허락했다.[1][11]null

기타 예

유기체 변경된 내용 What It Meas
미코박테리움스메그마티스 코엔자임 F420 약물 내성 결핵을[12] 유발하는 공동 작용자를 무력화시킬 수 있음
시아노박테리아 아이언몰리브데넘 코팩터 에너지용[13] 수소가스 생산
왕국 아르케아 몰리브데넘 질소효소 코팩터 질소 고정[14] 효율 개선
테르모아네로박테리아균류 글리세롤 탈수소효소 에탄올을 더 효율적으로 생산하는 열성 박테리아 만들기

공동 인자 공학을 사용한 기타 중요한 예에 대한 간략한 설명.null

메모들

  1. ^ a b c Raab, Michael; Keith Tyro; Gregory Stephanopoulos (2005). "Metabolic Engineering". Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology. 100 (763): 1–17. doi:10.1007/b136411. PMID 16270654.
  2. ^ Pollak, N; C Dolle; M Ziegler (2006). "The power to reduce: pyridine nucleotides - small molecules with a multitude of functions". Biochemistry. 402 (2): 205–218. doi:10.1042/BJ20061638. PMC 1798440. PMID 17295611.
  3. ^ a b c Heux, Stephanie; Remy Cachon; Sylvie Dequin (2006). "Cofactor engineering in Saccharomyces cerevisiae: Expression of a H2O-forming NADH oxidase and impact on redox metabolism". Metabolic Engineering. 8 (4): 303–314. doi:10.1016/j.ymben.2005.12.003. PMID 16473032.
  4. ^ a b c Vadali, Ravishankar; George Bennett (April 2004). "Cofactor engineering of intracellular CoA/acetyl-CoA and its effect on metabolic flux redistribution in Escherichia coli". Metabolic Engineering. 6 (2): 133–139. doi:10.1016/j.ymben.2004.02.001. PMID 15113566.
  5. ^ 아서 하든과 윌리엄 존 영."이스트 쥬이스의 알코올 발효"런던 왕립 협회의 의사 진행. 시리즈 B, 생물학적 성격의 논문 포함, 제77권, 제519호 (1906년 4월 12일), 페이지 405-420 JSTOR
  6. ^ Katzberg, Michael; Nadia Skorupa-Parachin; Marie-Francoise Gorwa-Grauslund; Martin Bertau (2010). "Engineering Cofactor Preference of Ketone Reducing Biocatalysts: A Mutagenesis Study on a γ-Diketone Reductase from the Yeast Saccharomyces cerevisiae". International Journal of Molecular Sciences. 11 (4): 1735–1758. doi:10.3390/ijms11041735. PMC 2871135. PMID 20480039.
  7. ^ Ethan Lan; James Liao (17 April 2012). "ATP Drives Direct Photosynthetic Production of 1-butanol in Cyanobacteria". Proceedings of the National Academy of Sciences. 109 (16): 6018–6023. doi:10.1073/pnas.1200074109. PMC 3341080. PMID 22474341.
  8. ^ San, Ka-Yiu; George N. Bennett; Susana J. Berrıos-Rivera; Ravi V. Vadali; Yea-Tyng Yang; Emily Horton; Fred B. Rudolph; Berna Sariyar; Kimathi Blackwood (April 2002). "Metabolic Engineering through Cofactor Manipulation and Its Effects on Metabolic Flux Redistribution in Escherichia Coli". Metabolic Engineering. 4 (2): 182–193. doi:10.1006/mben.2001.0220. PMID 12009797.[데드링크]
  9. ^ Giovannucci, Edward; Alberto Ascherio; Eric Rimm; Meir Stampfer; Graham Colditz; Walter Willett (May 1995). "Intake of Carotenoids and Retino in Relation to Risk of Prostate Cancer". Journal of the National Cancer Institute. 87 (23): 1767–1776. doi:10.1093/jnci/87.23.1767. PMID 7473833.
  10. ^ Potera, Carol (December 2005). "Making Succinate More Successful". Environmental Health Perspectives. 113 (12): A832–A835. doi:10.1289/ehp.113-a832. PMC 1314946. PMID 16330341.
  11. ^ Horvath, Laszlo; Ilona Peszlen; Perry Peralta; Bohumil Kasal; Laigeng Li (2010). "Mechanical Properties of Genetically Engineered Young Aspen with Modified Lignin Content and/or Structure". Wood and Fiber Science. 42.
  12. ^ Bashiri, G; Rehan, AM; Greenwood, DR; Dickson, JM; Baker, EN (2010). "Metabolic engineering of cofactor F420 production in Mycobacterium smegmatis". PLOS ONE. 5 (12): e15803. doi:10.1371/journal.pone.0015803. PMC 3012119. PMID 21209917.
  13. ^ Masukawa, H; Inoue, K; Sakurai, H; Wolk, CP; Hausinger, RP. (2010). "Site-directed mutagenesis of the Anabaena sp. strain PCC 7120 nitrogenase active site to increase photobiological hydrogen production". Applied and Environmental Microbiology. 76 (20): 6741–50. doi:10.1128/aem.01056-10. PMC 2953041. PMID 20709836.
  14. ^ Hernandez, JA; Curatti, L; Aznar, CP; Perova, Z; Britt, RD; Rubio, LM. (2008). "Metal trafficking for nitrogen fixation: NifQ donates molybdenum to NifEN/NifH for the biosynthesis of the nitrogenase FeMo-cofactor". Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (33): 11679–8. doi:10.1073/pnas.0803576105. PMC 2575292. PMID 18697927.
  15. ^ Yao, S; Mikkelsen, MJ. (2010). "Metabolic engineering to improve ethanol production in Thermoanaerobacter mathranii". Applied Microbiology and Biotechnology. 88 (1): 199–208. doi:10.1007/s00253-010-2703-3. PMID 20552355. S2CID 25646005.