다중 전극 집적측정법

Multiple electrode aggregometry
다중 전극 집적측정법
Multiplate Analyzer.jpg
멀티플레이트 분석기
목적혈소판 함수를 결정하는 중
테스트양친 모두에 의한 혈연

멀티플레이트 다중 전극 집적측정법(MEA)은 혈소판 기능을 전혈로 시험한 것이다.[1][2]이 테스트는 혈소판 장애 진단,[3][4][5] 항혈소판 치료 모니터링에 사용할 수 있으며 [6]심장 수술 시 수혈 요건 및 출혈 위험의 잠재적 예측자로도 조사된다.[7]


계기

멀티플레이트 MEA Analyzer(Roche Diagnostics International Ltd)에는 여러 검체나 작용제를 동시에 측정할 수 있는 채널이 5개 있다.기기는 혈소판이 시험 큐벳의 금속 전극에 모일 때 전기 임피던스 변화를 감지한다.각 큐벳에는 임피던스 변화를 측정하는 센서 전극 두 쌍이 들어 있다.중복 센서는 통합 품질 관리 역할을 하며, 측정값의 상관 계수가 0.98보다 크면 분석이 허용된다.각 곡선과 평균 곡선의 차이도 계산되며, 20% 미만의 차이는 허용된다.시험 큐벳에는 테플론 코팅 자석 교반봉도 포함되어 있다.집계가 일어날 때 임피던스의 증가는 통합 단위(AU)로 변환되어 컴퓨터 화면에 시간을 기준으로 표시된다.

샘플

제조업체는 검사할 샘플에 대해 항응고제로 히루딘 사용을 권장하고 있지만, 연구 결과 헤파린이 좋은 대안이 되는 것으로 나타났다.[8][9]각 분석마다 300µL의 혈액이 필요하며 동일한 양의 식염수로 희석된다.혈액과 식염수를 큐벳에 피펫팅한 후, 선택된 작용제가 첨가되기 전에 3분 동안 테스트를 배양한다.그런 다음 테스트를 시작하고 6분 동안 약 0.5초 간격으로 혈소판 집계를 기록한다.세 개의 매개변수가 계산된다: 집합, 속도 및 곡선 아래의 면적(AUC)집계(AU 단위)는 집계 곡선의 최대 높이, 속도(AU/min 단위)는 곡선의 최대 기울기이다.AUC는 가장 중요한 변수다.단위(U)에 기록되며, 집계 곡선의 높이와 기울기 모두에 영향을 받으며, 혈소판 활성을 측정하는 것이 가장 좋다.

멀티플레이트 테스트/리에이전트

주 장애 및 작용제에 의한 혈소판 통합 기능 편집
추가 정보: 플레이트 § 기능 테스트
ADP 에피네프린 콜라겐 리스토세틴
P2Y 수용체 억제제 또는 결함[10] 감소됨 정상 정상 정상
아드레날린 수용체 결함[10] 정상 감소됨 정상 정상
콜라겐 수용체 결함[10] 정상 정상 감소 또는 부재 정상
정상 정상 정상 감소 또는 부재
감소됨 감소됨 감소됨 정상 또는 감소

ADPtest

아데노신 인산염(Adenosine diphosphate, ADP)은 혈소판 작용제다.시험 큐벳에서 식염수분해 전혈에 첨가하면 혈소판의 ADP 수용체를 자극하여 혈소판을 활성화시킨다.혈소판의 활성화는 형태변화와 열화를 초래하고, 과립의 방출된 내용물은 혈소판을 더욱 활성화시킨다.또한 활성화는 당단백질 IIb/IIIa(GPIB/IIIa) 수용체에 순응적인 변화를 유도하여 피브리노겐에 높은 친화력을 준다.피브리노겐을 GPIB/IIIA 수용체에 결합하면 혈소판 대 혈소판 교량(plate-to-plate bridge)으로 이어지고 혈소판 집적을 초래한다.클로피도그렐과 프라수그렐과 같은 항혈소판제는 ADP 수용체 P2Y12를 불가역적으로 억제하여 ADP 유도 혈소판 집적이 감소한다.엡티피바티드와 같은 GPIB/IIIa 수용체를 억제하는 약도 ADP 유도 혈소판 반응을 감소시키거나 제거할 수 있다.[11]

ASPI테스트

ASPI테스트에서 아라크디돈산은 염분 분해 혈액 샘플에 첨가된다.아라키돈산은 사이클록시게나제1(COX1)에 의해 프로스타글란딘 H2(PGH2)로 변환되고, 이후 트롬박산 신타제에 의해 PGH2가 트롬박산 A2(TXA2)로 변환된다.TXA2는 혈소판 집적을 증가시키고 열화를 촉진하며 혈소판 활성화를 자극한다.아세틸살리실산(acetylsaliclic acid)과 마찬가지로 COX1의 억제와 GPIB/IIIa 수용체의 억제 또는 부재는 글란즈만의 트롬바스테니아에서 볼 수 있듯이 아라키돈산에 반응하여 혈소판 집적을 감소시킬 것이다.[12]

COLTest

콜라겐은 샘플-샐린 혼합물에 첨가되며 혈소판의 콜라겐 수용체에 결합된다.이것은 강력한 혈소판 활성제 TXA2로 변환되는 아라키돈산의 방출로 이어진다.COLTest는 COX1과 GPIB/IIIa의 억제와 Glanzmann의 혈전증에 민감하다.[13]

RISTO테스트

리스토세틴은 혈소판의 당단백질 Ib(GP1b) 수용체와 결합하는 폰 윌레브란트 인자(vWF)와 콤플렉스를 형성해 혈소판 활성화와 집적을 일으킨다.Reduced or absent aggregation in response to ristocetin can be caused by a lack of or reduction of vWF, as seen in von Willebrand disease (vWD), or absence or reduction in numbers of GP1b receptors, as in Bernard–Soulier syndrome (BSS). RISTOtest can be performed in two concentrations; RISTOhigh and RISTOlow.RISTOhi에서는 0,77 mg/ml의 리스토세틴 농도를 적용한다.이는 일반적으로 강한 혈소판 집계를 유도하며, 합계가 낮거나 없는 것은 앞에서 언급한 vWC와 BSS에 의해 발생할 수 있다.[14]RISTOlow에서 Ristocetin 농도는 0.2mg/ml에 불과하며, 일반적으로 강한 집적 반응을 유도하지 않는 수준에서 이루어진다.이 테스트는 vWC가 정상보다 혈소판을 집계하는 경향이 강한지 여부를 감지할 수 있으며, 이는 vWC라는 vWC 하위 유형에서 확인할 수 있다.[15]

트랩테스트

트롬빈 수용체 활성화 펩타이드-6(TRAP-6)은 트롬빈 수용체 프로테아제 활성화 수용체-1(PAR-1)을 통해 혈소판을 활성화한다.TRAP-6과 PAR-1의 결합은 혈소판의 GPIB/IIIA 수용체에 순응적 변화를 일으켜 피브리노겐에 높은 친화력을 준다.그런 다음 피브리노겐은 수용체에 결합하여 여러 혈소판을 교차 연결시켜 응집을 일으킨다.GPIB/IIA 수용체가 거의 없거나 거의 없는 Glanzmann의 혈전증(trombasthenia)에서 TRAPTest의 집계는 감소되거나 없을 수 있다. 또는 환자가 GPIB/IIA 대항제를 복용하고 있는 경우.트랩 테스트는 COX1 및 ADP 수신기 억제에 대한 사소한 민감도만 가지고 있다.[16]

ASA 시약

혈액 샘플에 ASA(아세틸살리실산) 시약을 추가하면 ASPI테스트와 COL테스트에서 집계 반응이 감소한다.ASA는 불가역적으로 혈소판의 COX1을 억제하여 TXA2의 생산을 억제한다.ASA 시약은 멀티플레이트를 이용한 혈소판 기능 테스트에서 품질 제어로 사용되어 ASPI 테스트 및 COL 테스트에서 비정상 혈소판 반응을 평가할 수 있다.[17]

GPIB/IIIa 길항제 시약

이 시약은 멀티플레이트 플레이트 기능 시험에서 품질 관리로 사용된다.GPIB/IIIA 길항제에서는 GPIB/IIIA 수용체에 대한 피브리노겐의 결합을 차단하여 혈소판-피브리노겐 결합 형성을 방지하고 모든 작용제에 대응하여 혈소판 집적을 현저히 감소시킨다.길항제 시약은 TRAP 테스트와 함께 사용되며 양성 대조군을 평가할 수 있다.[18]

프로스타글란딘 E1 시약

프로스타글란딘 E1(PGE1)은 아데닐시클라제 활성을 자극하여 혈소판의 순환 아데노신 모노인산염(cAMP)의 증가를 유발하는 혈소판 억제제로, cAMP는 세포내 신호분자로, cAMP의 증가는 ADP 수용체 P2Y1의 활성화에 의해 유도된 칼슘 동원과 혈소판 집적을 억제한다.P2Y1 수용체 활성화는 ADP에 대응하여 혈소판 집적을 개시한다.P2Y1 수용체는 ADP 유도 혈소판 활성화에 필요하지만, ADP에 대응한 전체 혈소판 집계를 위해 충분하지 않다.[19] cAMP는 혈소판 집계를 억제하고 혈소판의 cAMP의 감소된 양이 혈소판 집계를 유도한다.[20]PGE1 시약은 ADP 고감도(HS) 평가와 ADP 테스트의 양성 대조기의 두 가지 목적으로 ADP 테스트와 함께 사용된다.ADP 테스트에 소량의 PGE1(20µl)이 추가되면 정상 검체에서 모더레이트 집합 억제를 유도하지만 클로피도그렐에 의한 억제에는 혈소판의 민감도를 크게 높인다.변형된 시험을 '고감도'라고 하는 이유다.PGE1 50µl를 ADP 테스트에 추가하면 ADP 유도 집계를 강하게 억제하며, ADP 테스트의 양성 대조군 평가에 사용된다.[21]

참조

  1. ^ Ranucci, Marco; Simioni, Paolo (20 January 2016). Point-of-Care Tests for Severe Hemorrhage: A Manual for Diagnosis and Treatment. Springer. pp. 40–42. ISBN 978-3-319-24795-3.
  2. ^ Marcucci, Carlo; Schoettker, Patrick (17 September 2014). Perioperative Hemostasis: Coagulation for Anesthesiologists. Springer. pp. 54–56. ISBN 978-3-642-55004-1.
  3. ^ Albanyan, A; Al-Musa, A; AlNounou, R; Al Zahrani, H; Nasr, R; AlJefri, A; Saleh, M; Malik, A; Masmali, H; Owaidha, T (2015). "Diagnosis of Glanzmann thrombasthenia by whole blood impedance analyzer (MEA) vs. light transmission aggregometry". International Journal of Laboratory Hematology. 37 (2015 Aug, 37(4)): 503–508. doi:10.1111/ijlh.12320. PMID 25537026.
  4. ^ Awidi, A; Maqablah, A; Dweik, M; Bsoul, N; Abu-Khader, A (2009). "Comparison of platelet aggregation using light transmission and multiple electrode aggregometry in Glanzmann thrombasthenia". Platelets. 20 (2009 Aug, 20(5)): 297–301. doi:10.1080/09537100903006246. PMID 19548178.
  5. ^ Valarche, V; Desconclois, C; Boutekedjiret, T; Dreyfus, M; Proulle, V (2011). "Multiplate whole blood impedance aggregometry: a new tool for von Willebrand disease". Journal of Thrombosis and Haemostasis. 9 (2011 Aug, 9(8)): 1645–7. doi:10.1111/j.1538-7836.2011.04400.x. PMID 21679294.
  6. ^ Sibbing, D; Morath, T; Braun, S; Stegherr, J; Mehilli, J; Vogt, W; Schömig, A; Kastrati, A; von Beckerath, N (2010). "Clopidogrel response status assessed with Multiplate point-of-care analysis and the incidence and timing of stent thrombosis over six months following coronary stenting". Thrombosis and Haemostasis. 103 (2010 Jan, 103(1)): 151–9. doi:10.1160/TH09-05-0284. PMID 20062919.
  7. ^ Mishra, PK; Thekkudan, J; Sahajanandan, R; Gravenor, M; Lakshmanan, S; Fayaz, KM; Luckraz, H (2015). "The role of point-of-care assessment of platelet function in predicting postoperative bleeding and transfusion requirements after coronary artery bypass grafting". Annals of Cardiac Anaesthesia. 18 (2015 Jan–Mar, 18(1)): 45–51. doi:10.4103/0971-9784.148321. PMC 4900327. PMID 25566711.
  8. ^ Kaiser, AF; Neubauer, H; Franken, CC; Krüger, JC; Mügge, A; Meves, SH (2012). "Which is the best anticoagulant for whole blood aggregometry platelet function testing? Comparison of six anticoagulants and diverse storage conditions". Platelets. 23 (2012, 23(5)): 359–67. doi:10.3109/09537104.2011.624211. PMID 21999185.
  9. ^ Truss, NJ; Armstrong, PC; Liverani, E; Vojnovic, I; Warner, TD (2009). "Heparin but not citrate anticoagulation of blood preserves platelet function for prolonged periods". Journal of Thrombosis and Haemostasis. 7 (2009 Nov, 7(11)): 1897–905. doi:10.1111/j.1538-7836.2009.03589.x. PMID 19694945.
  10. ^ a b c d e Borhany, Munira; Pahore, Zaen; ul Qadr, Zeeshan; Rehan, Muhammad; Naz, Arshi; Khan, Asif; Ansari, Saqib; Farzana, Tasneem; Nadeem, Muhammad; Raza, Syed Amir; Shamsi, Tahir (2010). "Bleeding disorders in the tribe: result of consanguineous in breeding". Orphanet Journal of Rare Diseases. 5 (1). doi:10.1186/1750-1172-5-23. ISSN 1750-1172.
  11. ^ "ADPtest". Haemoview Diagnostics. Retrieved 17 February 2016.
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  18. ^ "GPIIb/IIIa Antagonist Reagent". Haemoview Diagnostics. Retrieved 17 February 2016.
  19. ^ Hechler, B; Gachet, C (1988). "P2 receptors and platelet function". Purinergic Signalling. 27 (2011 September, 7(3)): 293–303. doi:10.1007/s11302-011-9247-6. PMC 3166986. PMID 21792575.
  20. ^ Noé, L; Peeters, K; Izzi, B; Van Geet, C; Freson, K (2010). "Regulators of platelet cAMP levels: clinical and therapeutic implications". Current Medicinal Chemistry. 17 (2010, 17(26)): 2897–905. doi:10.2174/092986710792065018. PMID 20858171.
  21. ^ "PGE1 Reagent". Haemoview Diagnostics. Retrieved 17 February 2016.