로마노프스키 얼룩

Romanowsky stain
김사 얼룩이 묻은 혈막. 적혈구로 둘러싸인 백혈구(가운데).

로마노프스키 염색(Romanowsky-Giemsa staining)은 혈액학(혈액학)과 세포병리학(병든 세포학)에서 널리 사용되는 뚜렷하지만 유사한 염색의 전신인 원형 염색 기술입니다. 로마노프스키형 염색법은 병리학적 검체, 특히 혈액 및 골수막에서 현미경 검사를 위한 세포 감별과 [1]혈액 내 말라리아 등 기생충을 검출하는 데 사용됩니다.[2][3][4][5] 로마노프스키형 얼룩과 관련되거나 유래된 얼룩에는 기엠사, 제너, 라이트, 필드, 메이-그룬발트 및 라이슈만 얼룩이 포함됩니다. 염색 기술은 핏자국으로 사용될 수 있는 가능성을 처음으로 인식한 러시아 의사 드미트리 레오니도비치 로마노프스키 (1861–1921)의 이름을 따서 지어졌습니다.[6]

메카니즘

Romanowsky 염색의 가치는 세포 성분을 쉽게 구별할 수 있도록 다양한 색상을 생성할 수 있는 능력에 있습니다. 이 현상을 로마노프스키 효과, 또는 일반적으로 메타크로마시아라고 합니다.[7]

로마노프스키 효과

기엠사로 염색된 혈액 필름은 말라리아 감염을 일으키는 기생충인 열원충(이미지 중앙)을 보여줍니다.

1891년 로마노프스키는[8][9][10] 에오신(일반적으로 에오신 Y)과 메틸렌 블루의 숙성된 용액의 혼합물을 사용하여 염색을 개발했습니다: 세포핵의 염색질과 일부 백혈구의 세포질에 있는 과립 내에서 독특한 색조의 보라색입니다. 이것은 로마노프스키 또는 로마노프스키-김사 효과로 알려지게 되었습니다.[11][12][6][13][4] 에오신과 순수 메틸렌 블루 단독(또는 조합)으로는 로마노프스키 효과가 발생하지 않으며,[13][4] 그 효과를 발생시키는 활성 얼룩은 현재 애저 B와 에오신으로 간주됩니다.[14][3][13]

다색 메틸렌 블루

로마노프스키 타입의 얼룩은 순수한 염료의 조합으로 만들 수도 있고, 메틸렌 블루가 산화적 탈메틸화의 대상이 된 메틸렌 블루로 만들 수도 있는데, 이로 인해 메틸렌 블루가 다른 여러 얼룩으로 분해되고, 그 중 일부는 로마노프스키 효과를 내기 위해 필요합니다.[15][4] 이러한 산화 과정을 거친 메틸렌 블루를 "폴리크롬화 메틸렌 블루"라고 합니다.[15][4] 다색화 메틸렌 블루는 메틸렌 블루, 애저 A, 애저 B, 애저 C, 티오닌, 메틸렌 바이올렛 베른테센, 메틸 티오놀린 및 티오놀린을 포함하는 최대 11개의 염료를 포함할 수 있습니다.[4] 폴리크롬화 메틸렌 블루의 정확한 조성은 사용된 방법에 따라 다르며, 동일한 제조업체의 얼룩 배치도 조성이 다를 수 있습니다.[15]

Azure B와 Eosin이 Romanowsky 효과를 생성하는 데 필요한 성분으로 밝혀졌지만,[14][3][13] 순수한 형태의 이러한 얼룩이 염색 용액의 제형에 항상 사용된 것은 아닙니다.[4] Azure B(메틸렌 블루의 산화 생성물 중 하나)의 원래 공급원은 산화제로 처리되거나 Romanowsky의 경우 자연적으로 노화되도록 한 다색 메틸렌 블루 용액에서 유래했습니다.[3][13] 1891년 에른스트 말라초프스키는 로마노프스키 타입의 염색에 사용하기 위해 일부러 다색 메틸렌 블루를 사용한 최초의 사람입니다.[15][16]

종류들

May-Grünwald-Giemsa

주 기사: 5월-그룬발트 얼룩

May-Grünwald-Giemsa 염색은 로마노프스키 효과가 발생하지 않는 May-Grünwald 염색으로 먼저 염색한 후 로마노프스키 효과가 발생하는 Giemsa 염색을 포함하는 2단계 절차입니다.[17]

라이트 및 라이트-김사 얼룩

주 기사: 라이트의 얼룩

라이트의 얼룩은 단독으로 사용하거나 라이트-김사 얼룩으로 알려진 김사 얼룩과 함께 사용할 수 있습니다.[1] 라이트의 얼룩은 1902년에[18] 열을 사용하여 에오신 Y와 결합된 다색 메틸렌 블루를 생성하는 방법을 발표한 제임스 호머 라이트의 이름을 따서 명명되었습니다.[19][20][21][1] 다색화된 메틸렌 블루는 에오신과 결합하여 침전되도록 하여 메탄올에 재용해되는 에오신산을 형성합니다.[4] 라이트의 얼룩에 김사를 첨가하면 세포질 과립의 "붉은 색-보라색"의 밝기가 증가합니다.[1][21] 라이트와 라이트 기엠사 얼룩은 미국에서 일반적으로 사용되는 로마노프스키 타입의 얼룩 중 두 가지로 주로 혈액 및 골수 필름의 염색에 사용됩니다.[21][1]

리슈만 얼룩

주 기사: 리슈만 얼룩

1901년 William Leishman은[22] Louis Jenner와 유사하지만 순수한 메틸렌 블루를 다색 메틸렌 블루로 대체한 얼룩을 개발했습니다.[19][15][4] 라이슈만의 염색은 메탄올을 용매로 사용하여 다색화된 메틸렌 블루와 에오신 Y의 에오시네이트로부터 제조됩니다.[4]

김사 얼룩

주 기사: 김사 얼룩

김사염색은 메탄올과 글리세롤을 용매로 하여 "Azure II"와 에오신 Y로 구성되어 있습니다.[15] 비록 "Azure I"의 정확한 구성은 영업 비밀로 여겨지지만, "Azure II"는 Azure B (김사는 "Azure I"이라고 불렀다)와 메틸렌 블루의 혼합물로 생각됩니다.[4][15] 알려진 염료를 사용한 유사한 제형이 발표되었으며 상업적으로 이용 가능합니다. 기엠사 염색은 말라리아 기생충 검출 및 동정을 위한 표준 염색으로 간주됩니다.[5]

임상적 중요성

혈액 및 골수병리학

세포병리학에서 널리 사용되는 상업용 로마노프스키 염색 변종인 Diff-Quik으로 염색된 기관지 폐포 세척 표본

로마노프스키형 얼룩은 혈액 검사, 혈액 필름 형태의 검사, 골수 생검 및 흡인 도말의 현미경 검사에 널리 사용됩니다.[1][23] 혈액과 골수 모두 검사는 다양한 혈액 질환의 진단에 중요할 수 있습니다.[1][23] 미국에서는 Romanowsky 타입의 얼룩이 Wright와 Wright-Giemsa 변종이 널리 사용되는 반면,[1] 유럽에서는 Giemsa 얼룩이 일반적으로 사용됩니다.[1]

말라리아 및 기타 기생충 검출

로마노프스키형 염색 중 김사 염색은 혈액 샘플에서 말라리아 기생충을 검출하고 동정하는 데 특히 중요합니다.[5][15] 말라리아 항원 검출 검사는 말라리아 검출을 위한 혈액막의 염색과 현미경 검사의 대안입니다.[5]

세포병리학에서 사용

로마노프스키형 얼룩은 세침 흡인물에서 생성된 것과 요추 천자로 인한 뇌척수액과 같은 세포병리학적 표본의 염색에도 사용됩니다.[24]

역사

드미트리 레오니도비치 로마노프스키 (1861-1921).

이 일반적인 염색 방법에 대해 누가 공을 들일 자격이 있는지에 대한 논쟁이 존재하지만 대중적인 사용법은 이를 드미트리 레오니다비치 로마노프스키에게 돌렸습니다.[14][16][19]

1870년대에 Paul Ehrlich는 혈액 필름을 검사하기 위해 산성과 염기성 염료를 혼합하여 산성 푹신(산성 염료)과 메틸렌 블루(염기성 염료)를 사용했습니다.[25][26][27][28][16] 1888년 체슬라브 이바노비치 첸진스키는 메틸렌 블루를 사용했지만 에를리히가 사용한 산성 푹신을 에오신으로 대체했습니다.[14][27][28] 첸진스키의 염색 조합은 말라리아 기생충(Plasmodium 속의 한 구성원)을 염색할 수 있었습니다.[28][19] 에를리히나 첸진스키의 얼룩도 로마노프스키 효과를 내지 못했는데, 이들이 사용한 메틸렌 블루는 폴리크롬 처리되지 않았기 때문입니다.[16]

드미트리 로마노프스키는 1890년 말라리아에 감염된 혈액에 적용했을 때의 결과를 포함하여 그의 혈흔(노화된 메틸렌 블루와 에오신의 조합)에 대한 예비 결과를 발표했습니다.[6] 다색화된 메틸렌 블루의 사용은 로마노프스키의 얼룩(및 그 이후의 제형)을 로마노프스키 효과와 관련된 보라색 색상이 결여된 에를리히 및 첸진스키의 얼룩과 구별했습니다.[16] 로마노프스키의 1890년 출판물에는 그가 메틸렌 블루 용액을 어떻게 수정했는지에 대한 설명이 포함되어 있지 않았지만,[6][16] 그는 1891년 박사 논문에서 메틸렌 블루가 표면에 곰팡이가 생기기 시작한 후에 사용된 것으로 가장 잘 묘사했습니다.[6][16] 로마노프스키의 염색은 오래된 메틸렌 블루 용액을 사용한 것 외에 첸진스키의 염색 기술을 기반으로 했습니다.[16] 로마노프스키가 말라리아 기생충을 연구하기 위해 그의 방법을 사용한 것은 그의 염색 방법에 대한 지속적인 관심 덕분입니다.[26]

에른스트 말라초프스키

에른스트 말라초프스키(Ernst Malachowsky)는 1891년 드미트리 로마노프스키(Dmitri Romanowsky)와 같은 염색 조합을 독립적으로 관찰한 것으로 인정받았지만,[6][13] 그 역시 최초로 관찰한 것으로 인정받고 있습니다.[16][19] 말라초프스키는 의도적으로 다색화된 메틸렌 블루 용액을 처음으로 사용했는데,[15] 말라초프스키는 이 용액에 붕사를 염색 혼합물에 첨가하여 이를 달성했습니다.[16] 말라초프스키는 1890년 6월 15일에 얼룩을 시연했고, 같은 해에 "그의 공개 시위를 묘사한" 논문을 발표한 것으로 보도되었습니다.[19] Romanowsky와 Malachowsky 방법 모두 말라리아 기생충의 핵과 세포질을 염색할 수 있었는데, 이때까지 사용된 염색은 세포질만 착색했습니다.[19]

구스타프 김사.

1899년 루이 레오폴드 제너는 수성 혼합물에서 형성되는 침전물을 모아 메탄올에 재용해함으로써 보다 안정적인 메틸렌 블루와 에오신 염색법을 개발했습니다.[28][15][4] 수집된 침전물로부터 제조된 로마노프스키형 얼룩은 때때로 에오시네이트(eosinate)로 알려져 있습니다.[4] 얼룩의 안정성을 높이는 것 외에도 제너의 얼룩에 메탄올을 사용하면 혈액 샘플을 고정하는 효과가 [4]있었지만 제너의 얼룩 버전에서는 로마노프스키 효과가 나타나지 않습니다.[28][19][15]

1892년 리처드 메이와 루트비히 그ü발트는 1899년 제너가 제안한 버전과 유사한 버전의 얼룩(현재는 메이-그ü발트 얼룩)을 발표했으며, 마찬가지로 로마노프스키 효과를 나타내지 않습니다.

1901년 칼 로이터와 윌리엄 레이시먼은[22] 모두 알코올을 용매로 사용한 루이 제너와 말라초프스키의 다색 메틸렌 블루 사용을 결합한 얼룩을 개발했습니다.[19][15][4] 로이터의 얼룩은 메탄올 대신 에틸알코올을 사용한 제너의 얼룩과 달랐고, 라이슈만의 얼룩은 에오신 Y 대신 에오신 B를 사용한 제너의 얼룩과 달랐습니다.[19][4]

제임스 호머 라이트는 1902년에 열을 이용하여 메틸렌 블루를 폴리크롬화하는 방법을 발표했고[18], 이것을 에오신 Y와 결합시켰습니다. 이 기술은 라이트의 얼룩이라고 알려져 있습니다.[19][20]

구스타프 김사(Gustav Giemsa)의 이름은 1902년에 유용한 공식과 프로토콜을 발표한 것으로 알려져 있기 때문에 얼룩과 연관되기도 했습니다.[13][6][26] Giemsa는 조성의 변동성이 큰 다색 메틸렌 블루 용액이 아닌 순수한 염료의 조합을 사용하려고 시도했습니다.[20][19][15] 김사는 자신의 얼룩을 생산할 수 있는 권리를 팔았지만, 그가 어떻게 그것을 생산했는지에 대한 세부 사항을 완전히 공개하지는 않았습니다.[19][15] 김사는 1902년에서 1934년 사이에 그의 얼룩을 수정한 많은 것을 출판했습니다. 1904년[29] 그는 메탄올과 함께 그의 얼룩에 글리세린을 첨가하여 안정성을 높일 것을 제안했습니다.[23][19]

독일에서 생산된 기엠사 염색분말은 제1차 세계대전 중 공급이 중단될 때까지 미국에서 널리 사용되었으며, 이로 인해 제임스 호머 라이트의 메틸렌 블루 폴리크롬 공법의 활용도가 높아졌습니다.[19][1]

참고 항목

참고문헌

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