리소게니 수프

Lysogeny broth
LB 중병 및 LB 한천 플레이트
판상 배지 한천 LB

용융육수(Lysogeny brouth, LB)는 주로 박테리아 증식에 사용되는 영양이 풍부한 배지입니다.그 창시자인 Giuseppe Bertani는 LB를 용융 [1]수프를 의미하지만, LB는 또한 구어적으로 루리아 수프, 레녹스 수프, 생활 수프 또는 루리아-베르타니 배지를 의미하게 되었다.LB 배지의 공식은 1951년 용원성에 관한 베르타니의 첫 번째 논문에 발표되었습니다.이 기사에서는 수정된 단일 버스트 실험과 P1, P2, P3의 분리에 대해 설명했습니다.그는 시겔라 성장과 플라크 [1][2]형성을 최적화하기 위해 LB 배지를 개발했다.

LB 배지 제제는 1950년대까지만 [3][4][5][6][7]해도 대장균 재배의 업계 표준이었다.이러한 배지는 플라스미드 DNA와 재조합 단백질의 제조를 위한 분자 미생물학 응용 분야에서 널리 사용되어 왔다.그것은 여전히 [8]대장균의 실험실 재조합 변종을 유지하고 배양하는 데 사용되는 가장 일반적인 배지 중 하나이다.그러나 생리학적 연구의 경우 LB 배지의 사용은 [9]권장되지 않는다.

LB에는 몇 가지 일반적인 공식들이 있다.서로 다르지만, 일반적으로 성장을 촉진하는 데 사용되는 다음과 같은 성분의 다소 유사한 구성을 공유합니다.

수송용 나트륨 이온 및 삼투압 밸런스를 염화나트륨으로 제공한다.트립톤은 성장하는 박테리아에 펩타이드와 펩톤과 같은 필수 아미노산을 제공하는 데 사용되는 반면, 효모 추출물은 박테리아 성장에 도움이 되는 다량의 유기 화합물을 제공하는 데 사용됩니다.이 화합물에는 비타민과 특정 미량 원소가 포함되어 있습니다.

1951년 원본 논문에서 베르타니는 NaCl 10g과 용액 1L당 포도당 1g을 사용했다. 1957년 루리아는 베르타니의 원래 조리법을 그대로 [6]베꼈다.나중에 출판된 조리법은 일반적으로 포도당이 빠져있다.

공식

제제는 일반적으로 염화나트륨의 양이 다르므로 특정 세균주 및 원하는 배양 조건에 적합한 삼투압 조건을 선택할 수 있습니다.저염제인 레녹스와 루리아는 소금에 민감한 항생제를 필요로 하는 배양에 이상적입니다.

  • LB-Miller (10 g/L NaCl)
  • LB-Lennox (5 g/L NaCl)
  • LB-Luria(0.5g/L NaCl)

준비

LB 매체

다음은 LB 1L를 준비하는 일반적인 방법입니다.

  • 다음을 측정합니다.
    • 10 g 트립톤
    • 효모 추출물 5g
    • 필요에 따라 10g, 5g 또는 0.5g의 NaCl(위 공식 참조. 일부 박테리아는 NaCl에 민감함)
  • 증류수 또는 탈이온수 약 800ml에 고형물을 부유시킨다.
  • 측정 실린더에 증류수 또는 탈이온수를 넣어 정확성을 확보한다.
  • 121°C에서 20분간 고압 멸균한다.
  • 냉각 후 플라스크를 돌려 혼합이 이루어지도록 하면 LB를 사용할 수 있습니다.

pH 조정

고압 멸균 전에 일부 실험실에서 수산화나트륨으로 LB의 pH를 7.5 또는 8로 조절했습니다.그러나 수산화나트륨은 배지에 완충능력을 제공하지 못하기 때문에 세균 배양 시 pH가 급격히 변화한다.이를 피하기 위해 일부 실험실은 원하는 pH에서 1mol/L TRIS 스톡에서 희석한 5~10mmol/L TRIS 버퍼로 pH를 조절하는 것을 선호합니다.단, 대부분의 경우 pH를 반드시 조정할 필요는 없습니다.일부 실험실은 예방 차원에서 pH를 7.0으로 조정합니다.

TRIS에 의한 완충작용도 상당한 세균 증식 시 효과가 거의 없기 때문에 일반적으로 이러한 방식으로 LB의 pH를 조정할 필요가 없습니다.따라서 일부 육수 조리법(특히 배양이 상온 조건에서 장기간 저장되는 경우)에서 TRIS를 사용하는 것은 과학적 가치가 별로 없는 미신적인 절차로 간주될 수 있다.

「 」를 참조해 주세요.

레퍼런스

  1. ^ a b Bertani, G. (2004). "Lysogeny at mid-twentieth century: P1, P2, and other experimental systems". Journal of Bacteriology. 186 (3): 595–600. doi:10.1128/JB.186.3.595-600.2004. PMC 321500. PMID 14729683.
  2. ^ Bertani, G (1951). "Studies on lysogenesis. I. The mode of phage liberation by lysogenic Escherichia coli". J. Bacteriol. 62 (3): 293–300. doi:10.1128/jb.62.3.293-300.1951. PMC 386127. PMID 14888646.
  3. ^ 밀러, J. H.(1972)분자 유전학 실험이요콜드 스프링 하버 연구소, 뉴욕 콜드 스프링 하버.
  4. ^ Luria, S. E.; Adams, J. N.; Ting, R. C. (1960). "Transduction of lactose-utilizing ability among strain of E. coli and S. dysenteriae and the properties of the transducing phage particles". Virology. 12 (3): 348–390. doi:10.1016/0042-6822(60)90161-6. PMID 13764402.
  5. ^ Lennox, E. S. (1955). "Transduction of linked genetic characters of the host by bacteriophage P1". Virology. 1 (2): 190–206. doi:10.1016/0042-6822(55)90016-7. PMID 13267987.
  6. ^ a b Luria, S. E.; Burrous, J. W. (1957). "Hybridization between Escherichia coli and Shigella". J. Bacteriol. 74 (4): 461–476. doi:10.1128/jb.74.4.461-476.1957. PMC 289941. PMID 13475269.
  7. ^ Anderson, E. H. (1946). "Growth requirement of virus-resistant mutants of Escherichia coli strain B". Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 32 (5): 120–128. doi:10.1073/pnas.32.5.120. PMC 1078898. PMID 16588724.
  8. ^ 샘브룩, J., E.F.프리치, 그리고 T.마니아티스.(1989).분자 복제: 실험실 매뉴얼, 제2판콜드 스프링 하버 연구소, 뉴욕 콜드 스프링 하버.
  9. ^ 니카이도 H. (2009년)LB Medium의 한계.소소한 고려 사항 - Microbe 블로그.ASM. http://schaechter.asmblog.org/schaechter/2009/11/the-limitations-of-lb-medium.html