중첩중합효소 연쇄반응

Nested polymerase chain reaction
중첩된 PCR의 방법을 보여주는 다이어그램.

중첩된 중합효소 체인 반응(내포된 PCR)은 예기치 않은 프라이머 결합 부위가 증폭되어 제품의 비특정 결합을 줄이기 위한 중합효소 연쇄반응의 변형이다.[1]

중합효소 연쇄반응

중합효소 연쇄반응 자체는 온도 매개 DNA 중합효소를 통해 DNA 샘플을 증폭시키는 데 사용되는 과정이다.이 제품들은 염기서열 분석이나 분석을 위해 사용될 수 있으며, 이 과정은 포렌식 및 기타 인간의 유전적 사례에 대한 DNA 지문 채취와 함께 많은 유전학 연구소의 핵심 부분이다.기존의 PCR은 프라이머가 대상 DNA의 종단부를 보완할 것을 요구한다.PCR에서 나오는 제품의 양은 반응이 일어나는 온도 주기의 횟수에 따라 증가한다.흔히 발생하는 문제는 프라이머가 DNA의 부정확한 영역에 결합하여 예기치 않은 제품을 제공하는 것이다.이 문제는 PCR의 사이클 수가 증가함에 따라 더욱 가능성이 높아진다.

프라이머스

중첩된 중합효소 연쇄반응은 두 세트의 프라이머를 포함하며, 두 번째 세트는 첫 번째 실행 제품 내에서 2차 목표물을 증폭시키기 위한 것이다.이를 통해 1라운드에서 낮은 주행 횟수를 증폭할 수 있어 비특정 제품이 제한된다.두 번째 내포 프라이머 세트는 1차 증폭부터 의도된 제품만 증폭해야 하며, 특정 제품이 아닌 제품만 증폭해서는 안 된다.이를 통해 특정 제품이 아닌 제품은 최소화하면서 총 사이클을 더 많이 실행할 수 있다.이것은 배경이 높은 희귀한 템플릿이나 PCR에 유용하다.

과정

대상 DNA는 녹색으로 표시된 첫 번째 프라이머 세트와 함께 중합효소 연쇄 반응을 1차적으로 겪는다.대체 및 유사한 프라이머 결합 부위의 선택은 의도된 시퀀스를 포함하는 하나의 제품만 선택할 수 있다.

첫 번째 반응의 제품은 빨간색으로 표시된 두 번째 프라이머 세트로 두 번째 주행을 거친다.원하지 않는 PCR 제품 중 어떤 제품도 새로운 프라이머를 위한 결합 사이트를 포함할 가능성이 매우 낮으며, 두 번째 PCR의 제품이 원하지 않는 제품에 의해 거의 오염되지 않도록 보장한다.

참조

  1. ^ Elizabeth van Pelt-Verkuil; Alex van Belkum; John P. Hays (14 March 2008). Principles and Technical Aspects of PCR Amplification. Springer Science & Business Media. pp. 190–. ISBN 978-1-4020-6241-4.