단백질 태그

Protein tag

단백질 태그는 유전자 변형 단백질에 유전적으로 접목된 펩타이드 배열이다.종종 이러한 태그는 화학 약제 또는 단백질 분해 또는 인테인 스플라이싱과 같은 효소적 방법으로 제거할 수 있습니다.태그는 다양한 목적으로 단백질에 부착됩니다.그것들은 표적 단백질의 한쪽 끝에 첨가될 수 있기 때문에 C 말단 또는 N 말단 특이적이거나 C 말단 및 N 말단 특이적이다.일부 태그는 관심 단백질의 코드 배열에도 삽입됩니다. 내부 [1]태그로 알려져 있습니다.

단백질에 어피니티 태그를 부가하여 어피니티 기술을 사용하여 조생생물원으로부터 정제할 수 있도록 한다.여기에는 키틴결합단백질(CBP), 말토스결합단백질(MBP), 스트렙태그[2] 및 글루타티온S전달효소(GST)가 포함된다.폴리(His) 태그는 널리 사용되는 단백질 태그로, 금속 매트릭스에 결합합니다.

가용화 태그는 특히 대장균과 같은 샤페론 결핍종에서 발현되는 재조합 단백질에 대해 단백질의 적절한 접힘을 돕고 침전을 방지하기 위해 사용된다.이것들은 티오레독신과 폴리(NANP)를 포함한다.일부 어피니티 태그는 MBP 및 GST와 같은 가용화 에이전트로서의 이중 역할을 가집니다.

크로마토그래피 태그는 특정 분리 기술에 걸쳐 다른 분해능을 제공하도록 단백질의 크로마토그래피 특성을 변경하기 위해 사용됩니다.종종, 이것들은 FLAG-tag와 같은 폴리 음이온성 아미노산으로 구성됩니다.

에피토프 태그는 많은 다른 종에서 고친화성 항체가 안정적으로 생성될 수 있기 때문에 선택되는 짧은 펩타이드 배열이다.이것들은 보통 바이러스 유전자에서 유래하는데, 이것은 그들의 높은 면역반응을 설명해준다.에피토프 태그에는 ALFA 태그, V5 태그, Myc 태그, HA 태그, 스폿 태그, T7 태그 및 NE 태그가 포함됩니다.이러한 태그는 항체 정제에도 사용되지만 웨스턴 블롯, 면역 형광 및 면역 침강 실험에 특히 유용합니다.

형광 태그는 단백질의 시각적 판독치를 제공하기 위해 사용됩니다.GFP와 그 변형은 가장 일반적으로 사용되는 형광 태그입니다.GFP의 보다 고도의 용도에는 폴딩 리포터(접으면 형광, 접지 않으면 무색)로 사용하는 것이 포함됩니다.

단백질 태그는 특정 효소적 변형(비오틴 연결효소에 의한 비오티닐화 등) 또는 화학적 변형(형광 이미징을 위한 FlAsH-EDT2와의 반응 등)을 허용할 수 있다.종종 태그는 단백질을 다른 여러 성분과 연결하기 위해 결합된다.그러나 각 태그의 추가와 함께 태그와의 상호작용에 의해 단백질의 고유 기능이 폐지되거나 손상될 위험이 있다.따라서 정제 후 태그는 특정 단백질 분해(예: TEV 단백질 분해효소, 트롬빈, 인자 Xa 또는 엔테로펩티다아제)에 의해 제거된다.

단백질 태그 목록

(A-Z 아미노산 코드는 단백질 생성 아미노산#화학적 특성 참조)

펩타이드 태그

  • ALFA-tag, 생화학 및 현미경 응용을 위한 de novo 디자인의 헬리컬 펩타이드 태그(SRLTE).태그는 단일 도메인 항체의 레퍼토리에 의해 인식됩니다.
  • AviTag, 효소 BirA에 의한 비오티닐화를 가능하게 하는 펩타이드로 단백질은 스트렙타비딘(GLNDIFEAQKIEWHE)에 의해 분리될 수 있다.
  • C-tag, 파지 디스플레이(EPEA)[4][5]를 통해 개발된 단일 도메인 카멜리드 항체에 결합하는 펩타이드
  • 칼모듈린(KRWKKNFIAVSAANRFKKKISSGAL) 단백질에 결합된 펩타이드인 칼모듈린 태그
  • iCapTag™(intein Capture Tag), pH 변화에 의해 제어되는 펩타이드 기반 자가 인식 태그(MIKIATRKYLGKQNVYGIGVERDHNFALKNGFIAHN).특허받은 부품은 Npu(Nostoc phontiforme) interin에서 파생되었습니다.이 태그는 재조합 단백질과 그 조각의 단백질 정화에 사용됩니다.연구실에서 사용할 수 있으며, 제조 공정 하류에서 대규모 정화를 위해 제작되었습니다.iCapTag™ 표적 단백질 복합체는 광범위한 발현 호스트(예: CHO 및 E.coli 세포)에서 발현될 수 있습니다.완전히 발현된 mAb 또는 막단백질에는[6][7][8] 적합하지 않습니다.
  • 폴리글루탐산태그, 모노큐(EEEE) 등의 음이온 교환수지에 효율적으로 결합하는 펩타이드
  • 폴리아르기닌 태그, 양이온 교환 수지에 효율적으로 결합하는 펩타이드(5~9회 연속 R)
  • 항체에 의해 인식되는 펩타이드인 E-tag(GAPVPYPDPLEPR)
  • 항체(DYKDDDK)[9]에 의해 인식되는 펩타이드인 FLAG-tag
  • 항체에 의해 인식되는 헤마글루티닌(YPYDVPDYA)[10]의 펩타이드인 HA-tag
  • 히스태그, 니켈 또는 코발트 킬레이트(HHHHH)에 의해 결합된 5~10개의 히스티딘
    • Gly-His-Tag는 고정화된 금속 이온에 여전히 결합하지만 클릭 화학을[11] 위해 아조글루코닐화를 통해 활성화될 수 있는 N 말단 His-Tag 변형체(예: GHHH, GHHHHH, GSSHHHHH)이다.
  • myc-tag, 항체에 의해 인식된 c-myc에서 유래한 펩타이드(EQKLISEEDL)
  • NE-tag, 모노클로널 IgG1 항체에 의해 인식되는 18-아미노산 합성펩타이드(TKENPRSNQEESYDDNES)로, 웨스턴 블로킹, ELISA, 플로우 세포측정법, 면역세포화학, 면역흡수 및 단백질 정제 재조합체를 포함한 광범위한 응용 분야에 유용하다.
  • Rho1D4-tag는 소 로돕신(TETSQVAPA)의 세포내 C 말단의 마지막 9개의 아미노산을 말한다.이것은 막 단백질의 정화에 사용될 수 있는 매우 특별한 태그입니다.
  • 리보핵산가수분해효소 A(KETAAAKFERQHMDS) 유래 펩타이드인 S-tag
  • 스트렙타비딘(MDEKTTGWRGHVVEGLAGLELEQLRARHHPQREP)[13][14][self-published source?]에 결합하는 펩타이드인 SBP-tag
  • Softag 1, 포유류 발현용(SLAELLNAGLGS)
  • Softag 3, 원핵 발현용(TQDPSRVG)
  • 스폿태그(spot-tag)는 나노바디(PDRVRAVSHWSS)에 의해 면역침강, 친화력 정제, 면역형광 및 초분해능 현미경으로 인식되는 펩타이드이다.
  • 스트렙타비딘 또는 스트렙타비딘이라고 불리는 변형 스트렙타비딘에 결합하는 펩타이드(Strep-tag II:WSHPQFEK)[2]
  • T7-tag는 T7 유전자의 T7 주요 캡시드 단백질(MASMTGGQQMG)에서 유래한 에피토프 태그로, 다양한 면역측정 및 친화력 정화에 사용됨 주로 사용된다.
  • TC 태그, FlAsH 및 ReAsH 생체화학화합물(CCPGCC)에 의해 인식되는 테트라시스테인 태그
  • Ty 태그(EVHTNQDPLD)
  • V5 태그, 항체에 의해 인식되는 펩타이드(GKPIPNPLLGLDST)[16]
  • VSV-tag, 항체에 의해 인식되는 펩타이드(YTDIEMNRLGK)
  • Xpress 태그(DLYDDK)

공유 펩타이드 태그

  • 이소펩타그, 필린C 단백질(TDKDMTITFTNKDAE)[17]에 공유 결합하는 펩타이드
  • SpyTag, SpyCatcher 단백질(AHIVMVDAYKPTK)[18]에 공유 결합하는 펩타이드
  • SnoopTag는 SnoopCatcher 단백질(KLGDIFIFIKVNK)[19]에 공유 결합하는 펩타이드입니다.2세대 SnoopTagJr도 SnoopCatcher 또는 DogTag(SnoopLigase 매개)(KLGSIPIKVNK)[20]에 바인드하기 위해 개발되었습니다.
  • DogTag는 DogCatcher(DIPATYEFTDGKHYITNEPIPK)[21]에 공유 결합하는 펩타이드로 SnoopTagJr에 공유 결합할 수 있으며 SnoopLigase에 의해 매개된다.
  • SdyTag, SdyCatcher 단백질(DPIVMIDNDKPIT)[22]에 공유 결합하는 펩타이드.SdyTag/SdyCatcher는 SpyTag/SpyCatcher와 운동에 의존한 상호반응성을 가지고 있습니다.

단백질 태그

다른이들

HiBiT 태그는 Promega의 과학자들에 의해 개발되었다.11-아미노산 펩타이드 태그이며,[26] N- 또는 C-말단 또는 단백질 내부 위치에 융합할 수 있다.크기가 작기 때문에 CRISPR/[26]Cas9 기술을 통해 사람들이 관심을 갖는 다른 단백질과 빠르게 결합할 수 있습니다.

적용들

레퍼런스

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