플래그 태그

FLAG-tag

플래그-태그 또는 플래그 옥타펩타이드 또는 플래그 에피토프는 재조합 DNA 기술을 사용하여 단백질에 첨가될 수 있는 폴리펩타이드 단백질 태그로, 시퀀스 모티브 DYKDDK(여기서 D=아스파르트산, Y=티로신, K=리신)를 가지고 있다.[1]그것은 가장 구체적인 태그[2] 중 하나이며, 그것은 구체적이고 친화력이 높은 단핵항체가 개발된 인공항원이다. 따라서 친화력 크로마토그래피에 의한 단백질 정화에 사용될 수 있고 살아있는 세포 내에서 단백질을 찾는 데도 사용될 수 있다.숙주 유기체가 발현하는 야생형 단백질로부터 재조합성, 과다압축 단백질을 분리하는 데 사용되어 왔다.순한 정화 절차로 이러한 콤플렉스에 지장을 주지 않는 경향이 있기 때문에 복수의 서브유닛으로 단백질 콤플렉스를 격리하는 데도 사용할 수 있다.X선 결정학에 의한 3D 구조 결정을 수행하기 위한 충분한 순도와 품질을 가진 단백질을 얻기 위해 사용되어 왔다.

플래그 태그는 항체에 의한 인식이 필요한 많은 다양한 검사에 사용될 수 있다.주어진 단백질에 대한 항체가 없는 경우 단백질에 플래그 태그를 추가하면 플래그 시퀀스에 대한 항체로 단백질을 연구할 수 있다.면역유로에 의한 세포 국산화 연구, 면역복제 또는 SDS PAGE 단백질 전기영동 및 Western Blotting에 의한 검출이 그 예다.

N-terminus에서 C-terminus까지 Flag-tag의 펩타이드 시퀀스는 DYKDDK(1012 Da)이다.또한 일반적으로 3xFLag 펩타이드인 탠덤에 사용할 수 있다.DYKDHD-G-DYKDHD-I-DYKDDDK(Enterokinase Cleavage 사이트를 인코딩하는 최종 태그 포함)그것은 단백질의 C-terminus 또는 N-terminus에 융합되거나 단백질 안에 삽입될 수 있다.상업적으로 이용 가능한 일부 항체(예: M1/4E11)는 비문이 N-terminus에 존재할 때만 비문을 인식한다.그러나 다른 이용 가능한 항체(예: M2)는 위치 감도가 없다.플래그 태그의 티로신 잔여물은 황화시킬 수 있으며, 이는 플래그 에피토프의 항체 인식에 영향을 미칠 수 있다.[3]플래그 태그는 폴리히스틴 태그(His-tag), HA-태그 또는 myc-태그와 같은 다른 선호도 태그와 함께 사용할 수 있다.

역사

에피포프 태깅의 첫 사용은 1984년 문로와 펠햄에 의해 설명되었다.[4]플래그 태그는 과학 문헌에 발표된, 완전히 기능적이고 개선된 에피토프 태그의 두 번째 예였다.[1][5][6]특허받은 유일한 [7][8]에피타이프 태그였죠그 후, 그것은 전세계 실험실에서 가장 흔하게 사용되는 단백질 태그가 되었다.기존 단백질에 대해 단핵 항체가 먼저 격리된 후 표식으로 사용되는 다른 태그(예: micc, HA)와 달리, WAGE 에피토프는 단핵 항체가 상승하는 이상적인 인공 설계였다.플래그 태그의 구조는 다른 일반적인 상피 태그보다 수질이 강하여 첨가되는 단백질을 변성시키거나 비활성화할 가능성이 낮다는 점에서 부착된 단백질과의 호환성에 최적화되었다.또한 N-단자 플래그 태그는 특정 단백질 분해효소인 엔토키나아제(enteroptipidase)를 이용한 치료로 단백질에서 쉽게 제거할 수 있다.

세 번째 에피토프 태깅 보고서(HA-태그)[9]는 플래그 시스템이 처음 발송된 지 약 1년 만에 등장했다.

참고 항목

참조

  1. ^ a b Hopp TP, Prickett KS, Price VL, Libby RT, March CJ, Pat Cerretti D, Urdal DL, Conlon PJ (1988). "A Short Polypeptide Marker Sequence Useful for Recombinant Protein Identification and Purification". Bio/Technology. 6 (10): 1204–10. doi:10.1038/nbt1088-1204. S2CID 205272216.
  2. ^ "Cube Biotech". Cube Biotech. Retrieved 2020-02-13.
  3. ^ Hunter MR, Grimsey NL, Glass M (2016). "Sulfation of the FLAG epitope is affected by co-expression of G protein-coupled receptors in a mammalian cell model". Scientific Reports. 6: 27316. Bibcode:2016NatSR...627316H. doi:10.1038/srep27316. PMC 4895180. PMID 27273047.
  4. ^ Munro S, Pelham HR (1984). "Use of peptide tagging to detect proteins expressed from cloned genes: deletion mapping functional domains of Drosophila hsp 70". The EMBO Journal. 3 (13): 3087–93. doi:10.1002/j.1460-2075.1984.tb02263.x. PMC 557822. PMID 6526011.
  5. ^ Einhauer A, Jungbauer A (2001). "The FLAG peptide, a versatile fusion tag for the purification of recombinant proteins". Journal of Biochemical and Biophysical Methods. 49 (1–3): 455–65. doi:10.1016/S0165-022X(01)00213-5. PMID 11694294.
  6. ^ "Addition of an epitope to a protein coding sequence: FLAG-tag". The logic of molecular approaches to biological problems. Cornell University.
  7. ^ 플래그는 시그마알드리히사의 등록 상표다.LLC
  8. ^ 미국 특허 4703004, Hopp, Thomas P; Bektesh, Susan & Conlon 3th, Paul J 외, "식별 펩타이드와 단백질의 합성"은 Immenex Corporation에 할당된 1987-10-27을 발행했다.
  9. ^ Field J, Nikawa J, Broek D, MacDonald B, Rodgers L, Wilson IA, Lerner RA, Wigler M (1988). "Purification of a RAS-responsive adenylyl cyclase complex from Saccharomyces cerevisiae by use of an epitope addition method". Molecular and Cellular Biology. 8 (5): 2159–65. doi:10.1128/mcb.8.5.2159. PMC 363397. PMID 2455217.