스트렙타머

Streptamer

스트렙타머 기술은 항원특정 T세포의 가역적 격리 및 얼룩을 가능하게 한다.이 기술은 기존의 T세포 격리 방식과 스트렙태그 기술을 결합한 기술이다.T세포는 원칙적으로 관심의 T세포와 마커에 결합되는 분자 사이에 특정한 상호작용을 설정하여 분리되어 있어 격리가 가능하다.이 상호작용의 가역성과 그것이 수행되는 저온으로 기능 T세포의 격리 및 특성화가 가능하다.T세포는 표현적으로, 기능적으로 치료되지 않은 세포와 구별할 수 없는 상태로 남아 있기 때문에 이 방법은 임상 및 기초 T세포 연구에서 현대적인 전략을 제공한다.[1]

T세포연구의 고전적 방법

T세포는 적응 면역체계에 중요한 역할을 한다.그들은 복잡한 면역 반응을 조정, 조절, 조정할 수 있다.광범위한 임상 관련 측면은 T 셀의 기능 또는 오작동과 관련된다.자가면역 질환, 바이러스 또는 박테리아 병원균의 통제, 암이나 이식물의 발달 대 숙주 반응.지난 수년간 T세포의 식별을 위한 다양한 방법(ELISpot Assay, 세포내 사이토카인 점착, 분비물 분석)이 개발되었지만, 주요 조직적합성 복합체(MHC) 절차만이 기능적 상태와 무관하게 항원특정 T세포의 식별과 정화를 가능하게 했다.

MHC 절차는 원칙적으로 MHC-펩타이드 복합체인 T세포수용체(TCR) 리간드를 얼룩 탐침으로 사용하고 있다.MHC는 TCR과 상호작용하며, T세포에 차례로 표현된다.TCR-MHC 상호작용은 서로에 대한 친화력이 매우 약할 뿐이기 때문에 단층 MHC-epitope 복합체는 안정적인 결합을 제공할 수 없다.이 문제는 복합 MHC-epitope를 사용하면 해결할 수 있는데, 이는 결합 탐욕도를 높여 안정적인 결합을 가능하게 한다.MHC-멀티머에 결합된 플루오로크롬은 흐름 세포계에 의한 T세포의 식별에 사용될 수 있다.오늘날, MHC 분자는 빠르게 증가하는 질병으로 알려진 항원 펩타이드와 함께 재조합하여 생산될 수 있다.

스트렙타머 기술

스트렙타머 백본

Streptamer stating 원리는 MHC-멀티머에 의한 T세포 격리의 고전적인 방법을 Strep-tag/Strep-Tactin 기술과 결합한다.Strep-tag는 Strep-Tactin이라고 불리는 돌연변이 스트렙타비딘 분자의 바이오틴 결합 부위에 적당한 결합 친화력을 보이는 짧은 펩타이드 시퀀스다.스트렙타머 기술의 경우, 스트렙타민 분자는 다중화되어 "백본"을 형성하므로, 스트렙타민 분자는 줄무늬 단백질에 결합하는 플랫폼을 만든다.또한 Strep-Tactin 백본에는 형광 라벨이 있어 흐름 세포분석을 할 수 있다.MHC-Strep-Tactin 백본과 MHC-Strep-tag 융합 단백질을 배양하면 MHC-멀티머가 형성되어 T세포의 항원 고유 얼룩이 가능하다.

가역성 얼룩

d-biotin 분자는 Strep-tag보다 Strep-Tactin에 대한 친화력이 훨씬 높기 때문에 결합 부지를 놓고 효과적으로 경쟁할 수 있다.[2][3]따라서 상대적으로 농도가 낮은 d-biotin이 존재하는 경우 Strep-tag와 Strep-Tactin의 상호작용을 기반으로 하는 MHC 멀티머는 쉽게 교란된다.Strep-Tactin 백본 없이 단일 MHC-Strep-태그 융접 단백질은 결합 친화력이 약하기 때문에 T세포의 TCR에서 자연적으로 분리된다(모노메릭 MHC-epitope 복합체는 안정적인 결합을 제공할 수 없다, 위 참조).

참조

  1. ^ Knabel, M, Franz, T.J, Schiemann, M, Wulf, A, Villmow, B, Schmidt, B, B, B, Bernhard, Wagner, H.와 Busch, D.(2002) T세포 집단의 기능적격리와 효과적인 채택 이전을 위한 가역 MHC 멀티머.네이처 메디컬 8 (6), 631-637.
  2. ^ 슈미트 TGM과 스카라 A, 2007.1단계 정화 및 고선호도 검출 또는 단백질 포획을 위한 스트렙태그 시스템.네이처 프로토콜 2, 1528-1535.
  3. ^ http://www.strep-tag.com