리보프로브

Riboprobe

RNA 프로브의 줄임말인 리보프로브는 현장 교배 중에 [1]표적 mRNA 또는 DNA를 검출하는 데 사용할 수 있는 라벨이 부착된 RNA의 세그먼트입니다.RNA 프로브는 바이러스 프로모터의 적절한 플라스미드 하류에 삽입된 복제 DNA의 시험관내 전사에 의해 제조될 수 있다.일부 박테리아 바이러스는 바이러스 촉진제에게 매우 특이적인 자체 RNA 중합효소를 코드화한다.NTP라는 라벨이 붙은 이러한 효소와 전방 및 역방향으로 삽입된 삽입물을 사용하면 복제 유전자로부터 감각 리보프로브와 안티센스 리보프로브를 모두 생성할 수 있습니다.

제임스 왓슨과 프란시스 크릭이 DNA 분자의 이중나선 특성을 밝힌 이후(왓슨과 크릭, 1953년[2]) 네 가지 염기 사이의 수소 결합은 잘 알려져 있다: 아데닌은 항상 티민에 결합하고 시토신은 항상 구아닌에 결합한다.이 결합 패턴은 현대 유전 기술의 기본 원리이다.Joseph Gall과 Mary Lou Pardue는 1969년에 방사능으로 표시된 리보솜 DNA가 현장 교배를 수행하기 위해 DNA 프로브를 사용하는 최초의 연구자로 알려진 개구리 [3]알에서 상보적인 DNA 서열을 검출하는데 사용될 수 있다는 것을 증명하는 논문을 발표했다.RNA 프로브는 동일한 기능을 수행할 수 있는 것으로 입증되었으며 현장 교배에도 사용되었습니다.형광 염색 프로브는 안전, 안정성 및 검출 [4]용이성을 고려하여 무선 라벨 프로브 대신 사용되었습니다.DNA 염기서열을 검출하는 것은 "바늘이 관심 있는 DNA 염기서열이고 건초 더미가 염색체[5] 세트인 건초더미에서 바늘을 찾는 것"과 유사합니다.DNA 나선의 연결 해제, 재결합 및 염기쌍화의 놀라운 정확성은 리보핵세포가 염색체에서 상보적인 DNA 서열을 찾을 수 있는 능력을 부여한다.

적용들

현장 교배 중에 사용되는 프로브에는 리보프로브와 DNA 올리고뉴클레오티드 프로브 [6]두 가지가 있습니다.리보프로브는 DNA 탐침이 불충분한 배아 발달 연구에 필수적이다.라벨이 부착된 (예를 들어 형광 염색된) 안티센스 RNA 프로브를 발달 중인 배아의 mRNA와 교배하여, 다양한 발달 단계에서 유전자의 발현을 추적하는 것이 가능하다.RNA 프로브는 전체 배아의 발달을 감지하거나 관심 있는 조직 부분에만 사용할 수 있습니다.리보프로브가 전사된 mRNA에 결합하는 능력은 RNA 프로브를 모델 유기체에 대한 연구에서 중요하게 만듭니다.드로소필라, 제브라피쉬, 병아리, 제노푸스, 쥐.[7]RNA 탐침은 또한 면역 조직 화학에 사용되어 [8]배아의 조직 감염을 확인할 수 있다.바이러스 mRNA는 그것의 안티센스 RNA 탐침에 의해 표적이 될 수 있는 반면, 감염된 조직은 탐침과 교배할 수 있는 상보적인 mRNA를 가지고 있지 않다; 각 유기체의 고유한 mRNA 배열은 특정 유전자의 발현을 매우 효과적이고 정확하게 검출하게 한다.

FISH(Fluorence in sit hybridization)는 가장 널리 사용되는 리보프로브 기술입니다.FISH에서는 타깃 배열과 프로브가 필수적이며, 우선 프로브에는 직접 또는 간접 라벨링 전략 중 하나로 라벨링된다. 즉, 간접 라벨링에는 합텐 수식 뉴클레오티드가 사용되며, 직접 라벨링에는 불소 수식 뉴클레오티드가 사용된다.표적 DNA와 프로브는 변성 및 혼합되어 DNA 서열을 재결합할 수 있습니다.간접 라벨링은 효소 또는 면역학적 시스템을 사용해야 하지만 직접 [9]라벨링보다 더 큰 신호 증폭을 제공하는 가시화된 신호를 생성하기 위해 추가 단계가 필요합니다.

FISH 프로브는 핵형 연구에도 사용할 수 있습니다.DNA 탐침은 각 염색체에 고유한 색을 내는 다양한 불소 색소로 라벨링될 수 있습니다.탐침은 각 염색체에 고유한 패턴을 생성하면서 중기의 염색체와 교배된다.이 방법은 염색체의 전위, 결실 및 복제를 부위별 [10]FISH에 비해 더 큰 규모로 연구하고자 할 때 유용하다.

레퍼런스

  1. ^ Lackie, John (2010). A Dictionary of Biomedicine. Oxford University Press. ISBN 9780199549351.
  2. ^ Watson, J.D.; F.H.C., Crick (1953). "Molecular structure of nucleic acids: A structure for deoxyribose nucleic acid". Nature. 171 (4356): 737–738. doi:10.1038/171737a0. PMID 13054692. S2CID 4253007.
  3. ^ Gall, J.G.; Pardue, M.L. (1969). "Formation and detection of RNA-DNA hybrid molecules in cytological preparations". Proceedings of the National Academy of Sciences. 63 (2): 378–383. doi:10.1073/pnas.63.2.378. PMC 223575. PMID 4895535.
  4. ^ Rudkin, G.T.; Stollar, B.D. (1977). "High resolution of DNA-RNA hybrids in situ by indirect immunofluorescence". Nature. 265 (5593): 472–474. doi:10.1038/265472a0. PMID 401954. S2CID 4165112.
  5. ^ O'Connor, Clare (2008). "Fluorescence In Situ Hybridization (FISH)". Nature Education. 1: 171.
  6. ^ Lajtha, Abel (2007). Handbook of Neurochemistry and Molecular Neurobiology Practical Neurochemistry Method. United States: Springer ScienceþBusiness Media. p. 364. ISBN 9780387303598.
  7. ^ Clark, Melody (1996). In Situ Hybridization. ISBN 9783527308859.
  8. ^ D.R., Kapczy (2001). "Detection of In Ovo-Inoculated Infectious Bronchitis Virus by Immunohistochemistry and In Situ Hybridization with a Riboprobe in Epithelial Cells of the Lung and Cloaca". Avian Diseases. 46 (3 (Jul.– Sep., 2002)): 679–685. doi:10.1637/0005-2086(2002)046[0679:doioii]2.0.co;2.
  9. ^ Speicher, M.R.; et al. (2005). "The new cytogenetics: blurring the boundaries with molecular biology". Nature Reviews Genetics. 6 (10): 782–92. doi:10.1038/nrg1692. PMID 16145555. S2CID 15023775.
  10. ^ McNeil, N.; Ried, T. (2000). "Novel molecular cytogenetic techniques for identifying complex chromosomal rearrangements: technology and applications in molecular medicine". Expert Reviews in Molecular Medicine. 2000: 1–14. doi:10.1017/S1462399400001940. PMID 14585138.

Baynes, John W.; Marek H. Dominiczak (2005). Medical Biochemistry 2nd. Edition. Elsevier Mosby. p. 477. ISBN 978-0-7234-3341-5.

외부 링크

YouTube 비디오: 현장 하이브리드화

현장 형광 하이브리드에 대한 자세한 설명:

리보프로브 체외 전사 시스템 기술 설명서: