태 버퍼

TAE buffer

TAE buffer는 Tris base, 아세트산, EDTA의 혼합물을 함유한 완충용액이다.

분자생물학에서 그것은 일반적으로 DNA와 RNA와 같은 핵산의 분리를 위해 아가로오스 전기영양증에 사용된다.[1]그것은 보통 pH 8.3에 있는 트리스 아세테이트 버퍼와 분할된 계수를 배열하는 EDTA로 구성되어 있다.태는 TBE보다 버퍼 용량이 낮고 쉽게 소진될 수 있지만, 선형, 이중 좌초 DNA는 태아에서 더 빨리 작동한다.

앞서 브로디앤컨은 젤 시스템의 보다 효율적이고 저렴한 전도성 매체를 위해 TBE와 TAE 버퍼로 대체해 전기영동 완충재를 단순화했다.[2]

사용하다

TAE(Tris-acetate-EDTA) 버퍼는 실행 버퍼와 아가로스겔에서 모두 사용된다.[3]광범위 돌연변이 분석을 위한 변성 그라데이션 젤 전기영동법에서의 사용도 설명되었다.[4]TAE는 염화나트륨을 함유하고 있지 않은 용액에서 DNA의 이동성을 연구하기 위해 다양한 농도로 사용되어 왔다.[5]그러나 DNA 샘플에 포함된 염화나트륨(및 많은 다른 소금)의 고농도는 그 이동성을 지연시킨다.이로 인해 발생하는 DNA 밴딩 패턴이 잘못 해석될 수 있다.

준비

TAE buffer는 일반적으로 실험실용 50배의 표준원액으로 준비된다.242g 트리스 베이스를 물에 녹여 57.1ml의 빙하 아세트산과 500mM EDTA(pH 8.0) 용액 100ml를 첨가하고 최종 용액을 최대 1리터까지 가져와 50배의 스톡 용액을 준비할 수 있다.이 표준원액은 49:1을 물로 희석하여 1배의 사용용액을 만들 수 있다.이 1× 용액에는 40 mM Tris, 20 mM 아세트산, 1 mM EDTA가 들어 있다.

아니요. 이름 1두더지당 50배 용액 50× 1×용액 1X
1 트리스 베이스 121.1 g/L 2M 242.2 g/L 40 mM 4.844 g/L
2 아세트산 57.1 ml/L 1M 57.1 ml/L 20 mM 1.21ml/L
3 EDTA 이소듐 염분 디하이드레이트 372.24 g/L 50 mM 18.612 g/L 1mM 0.372 g/L

2 M = 2000 mM, 따라서 2000 mM /50 = 1× 40 mM.
1 M = 1000 mM이므로 1000 mM /50 = 1× 20 mM.
50 mM /50 = 1 x의 경우 1 mM.

우선 이 성분들은 500ml에 용해한 뒤 1000ml까지 만들어야 한다.
참고: EDTA는 용해하는 데 더 많은 시간이 소요되므로 EDTA를 용해하는 동안 자기 교반기(EDTA의 3, 4회 분량)를 사용한다.

50배 TAE 버퍼 준비 방법의 단계별 레시피는 protocols.io에서 확인할 수 있다.[6]

참고 항목

참조

  1. ^ R.C. Ogden과 D.A.A. (1987) 아가로스와 아크릴아미드 겔의 전기영양증.방법 효소몰, 152:, 61-87
  2. ^ Brody, J.R., Kern, S.E. (2004) 표준 DNA 전기영양에 대한 전도성 매체의 역사와 원리.항문 생화학. 333(1):1-13. doi:10.1016/j.ab.2004.05.054 PMID15351274PDF
  3. ^ 샘브룩, 프리치, 마니아티스(1989) 분자복제: 실험실 매뉴얼, 제2편, 콜드 스프링 하버 연구소 프레스, 콜드 스프링 하버, 뉴욕, 제3권, 부록 B.11 및 B.23 ISBN 0-87969-309-6
  4. ^ 헤이스, V.M. 외, (1999) 그라데이션 젤 전기영동체를 변성시켜 광범위한 돌연변이 분석을 위한 젤 성분 및 전기영동 조건의 개선.핵산 자원, 27(20): e29. PMID 10497279
  5. ^ Stellwagen, E, Stellwagen, N.C. (2002) NaCl을 첨가하거나 첨가하지 않은 다른 농도의 Tris-acetate-EDTA 버퍼에서 DNA의 자유로운 솔루션 이동성.전기영양증, 23 (12): 1935-1941.PMID 12116139
  6. ^ Behle, Anna; Pawlowski, Alice. "Recipe for 50x TAE buffer". doi:10.17504/protocols.io.gtvbwn6. {{cite journal}}:Cite 저널은 필요로 한다. journal=(도움말)