혈구계

Hemocytometer
혈구계.두 개의 반반사 직사각형은 계수실입니다.
챔버 장착
혈구계 그리드(표 참조)

혈구계(또는 혈구계)는 원래 [1]혈구계수에 사용되는 계수실 장치이다.

혈구계는 루이-샤를 말라세즈가 발명했으며 정밀 체적 챔버를 만드는 직사각형 움푹 들어간 두꺼운 유리 현미경 슬라이드로 구성되어 있습니다.이 방은 레이저 식각된 수직선 그리드로 새겨져 있습니다.이 장치는 선으로 둘러싸인 면적을 알 수 있도록 세심하게 제작되었으며, 챔버의 깊이도 알 수 있습니다.따라서 그리드의 정의된 영역을 관찰함으로써 특정 부피의 유체 중 셀 또는 입자의 수를 카운트하여 유체 전체의 셀 농도를 계산할 수 있다.잘 사용되는 혈구계는 뉴바우어 계수실이다.[2]

다른 규칙을 가진 다른 유형의 혈구계가 다른 용도로 사용되고 있습니다.척수액계수에 일반적으로 사용되는 Fuchs-Rosental 규칙, 식품 및 식품포장제품의 곰팡이에 사용되는 Howard Mold 규칙, 분뇨물질의 미생물 알계수에 사용되는 McMaster 계란슬라이드 규칙, Nageotte Chamber 판결, 백혈구 감소 혈소판 성분에서 낮은 수준의 백혈구 계수를 위한 Palmer Nanoplankton 규칙작은 널빤지를 세는 것도요개량된 Neubauer 규칙을 사용한 Petroff-Hausser 카운터는 박테리아와 정자 수에 사용되며 다양한 챔버 깊이로 제공됩니다.혈구계의 Sedgwick-Rafter Cell은 주로 식수 현미경 검사에 사용하도록 설계되었습니다.

원칙

개량된 Neubauer 규칙 혈구계의 격자 영역은 9개의 1 x 1 mm (1 mm) 정사각형으로2 구성됩니다.이 세 가지 방향은 0.25 x 0.25 mm(0.0625 mm2), 0.25 x 0.20 mm2(0.05 mm) 및 0.20 x 0.20 mm2(0.04 mm)입니다.중앙 사각형은 0.05 x 0.05 mm(0.00252 mm) 정사각형으로 더 세분됩니다.혈구계의 솟아오른 가장자리는 표식 그리드에서 0.1mm 떨어진 커버 슬립을 유지하여 각 정사각형에 정의된 체적을 제공합니다([3]오른쪽 그림 참조).

치수 지역 0.1mm 깊이에서의 볼륨
1 x 1 mm 1mm2 100nL
0.25 x 0.25 mm 0.0625mm2 6.25nL
0.25 x 0.20 mm 0.05mm2 5nL
0.20 x 0.20 mm 0.04mm2 4 nL
0.05 x 0.05 mm 0.0025mm2 0.25nL

사용.

Hemocytometer를 사용하려면 먼저 Counting 챔버와 함께 제공되는 특수 Coverslip이 Counting 챔버의 표면에 올바르게 위치하는지 확인하십시오.두 개의 유리 표면이 적절히 접촉하면 뉴턴의 고리를 관찰할 수 있습니다.이 경우 Coverslip의 가장자리에 Cell Suspension을 적용하여 캐피럴리 작용에 의해 Void로 흡인하여 챔버를 시료로 완전히 채운다.챔버 내의 셀 수는 현미경을 사용하여 직접 계수할 수 있으며 시각적으로 구별 가능한 셀은 차등 계수할 수 있다.챔버 내의 셀 수는 샘플이 생성된 혼합물의 셀 농도 또는 밀도를 계산하는 데 사용됩니다.챔버 내의 셀 수를 챔버 부피로 나눈 값이며, 이는 처음부터 알려져 있으며, 모든 희석 및 계수 단축키를 고려합니다.

[4]

여기서 희석된 샘플의 부피(희석 후)를 샘플의 원래 혼합물의 부피(희석 전)로 나눈 값이 희석 계수이다.예를 들어 원래 혼합물의 부피가 20 μL이고 (20 μL 희석제를 첨가하여) 1회 희석한 경우 괄호 안의 두 번째 항은 40 μL/20 μL이다.카운트의 사각형 볼륨은 크기에 따라 맨 위의 표에 표시되는 볼륨입니다(오른쪽 그림 참조).셀 수는 한 챔버에 있는 정사각형에 걸쳐 셀 수 있는 모든 셀의 합계입니다.셀의 계수 비율은 설정된 정사각형 내의 모든 내부 정사각형이 계수되지 않은 경우 적용됩니다(즉, 모서리 정사각형의 20개 중 4개만 계수되면 이 항은 0.2와 같아집니다).부피가 100나노리터(nL)인 큰 정사각형을 셀 때 10000을 곱하면 밀리리터당 원하는 셀 카운트가 됩니다.

혈구계의 부분(측면에서 볼 때)이 식별된다.

대부분의 응용 프로그램에서는 네 개의 큰 모서리 정사각형만 사용됩니다.맨 위 라인과 왼쪽 라인에 연결되거나 접촉하는 셀은 카운트되지만 오른쪽 또는 맨 아래 라인에 연결되거나 접촉하는 셀은 [5]무시됩니다.

요구 사항들

100배 출력의 혈구계 그리드를 비웁니다.

샘플을 채취하기 전에 원래의 서스펜션을 완전히 혼합해야 합니다.따라서 표본이 추출된 원래 혼합물의 특정 영역의 아티팩트가 아니라 표본이 대표적입니다.

셀 수와 관련하여 혼합물의 적절한 희석법을 사용해야 한다.샘플이 충분히 희석되지 않으면 셀이 너무 많아 셀 수가 없습니다.너무 묽으면 표본 크기가 원래 혼합물의 농도에 대해 강하게 추론하기에 충분하지 않습니다.

두 번째 챔버에서 용장시험을 실시함으로써 결과를 비교할 수 있다.계수 오차(카운트의[6] 제곱근)의 2배 이상 차이가 나면 표본을 추출하는 방법을 신뢰할 수 없습니다(예: 원래 혼합물이 완전히 혼합되지 않음).

Counting 챔버는 챔버 리드(두께 및 평탄도가 인증된 특수 커버 슬립)를 장착한 후 모세관 작용으로 채워야 합니다.이렇게 하면 커버 슬립이 위에 놓이기 전에 셀이 유리에 침전/붙거나 일부 부피가 증발하여 셀 농도가 과대평가되는 위험을 방지할 수 있습니다.침전물은 박테리아에 의한 문제는 덜하지만, 낮은 습도의 에어컨 실험실에서 더 많이 발생하는 증발은 여전히 최소화되어야 한다.

적용들

  • 혈액계수: 자동계측기가 잘 작동하지 않는 비정상적인 혈액세포를 가진 환자에게 적합합니다.
  • 정자수
  • 소변 현미경 검사
  • 세포 배양: 시간 경과에 따른 세포 성장을 하위 배양하거나 기록할 때.
  • 맥주 양조: 이스트를 준비하기 위해.
  • 식물플랑크톤세포수
  • 다운스트림 분석을 위한 세포 처리: 많은 테스트(PCR, 플로우 세포 측정)에서 정확한 세포 수가 필요한 반면, 다른 테스트에서는 높은 세포 생존성이 요구됩니다.
  • 세포 크기 측정: 마이크로그래프에서,[7] 알려진 혈구계 사각형 너비로 축척함으로써 실제 세포 크기를 추정할 수 있습니다.

레퍼런스

  1. ^ Absher, Marlene (1973). "Hemocytometer Counting". Tissue Culture. pp. 395–397. doi:10.1016/B978-0-12-427150-0.50098-X. ISBN 9780124271500.
  2. ^ "Fig. 8. Views of an improved Neubauer ruling hemocytometer slide. (A) Top view..." ResearchGate. Retrieved 29 March 2018.
  3. ^ "Hemocytometer square size • Hemocytometer". April 11, 2013.
  4. ^ "Cell Counting with Neubauer Chamber - Basic Hemocytometer Usage, Óscar Bastidas" (PDF).
  5. ^ Strober W (2001). "Monitoring cell growth". In Coligan JE, Bierer BE, Margulies DH, Sherach EM, Strober W (eds.). Current Protocols in Immunology. Vol. 5. USA: John Wiley & Sons. p. A.2A.1. doi:10.1002/0471142735.ima03as21. ISBN 0471142735. PMID 18432653.
  6. ^ Shapiro, Howard (31 January 2001). "very rare events: how low can you go?".
  7. ^ "Measuring cell size with a hemocytometer". Archived from the original on 2012-06-29. Retrieved 2013-06-02.

외부 링크