pglo

pGLO 플라스미드는 유전자 변형 유기체를 만들기 위한 벡터로서 생명공학에서 사용되는 공학적 플라스미드이다.플라스미드는 녹색 형광 단백질(GFP)과 암피실린 내성 유전자를 포함한 여러 리포터 유전자를 포함하고 있다.GFP는 해파리인 Aequorea victoria로부터 분리되었다.아라비노오스 대사 유전자와 쌍방향 프로모터를 공유하기 때문에 GFP 유전자는 아라비노스의 존재 하에서 발현되어 트랜스제닉 유기체가 자외선 하에서 형광을 발현하게 된다.GFP는 pGLO 플라스미드를 함유한 박테리아에서 +arabinose 플레이트에서 배양하여 유도할 수 있으며, pGLO는 Bio-Rad Laboratories에서 제조한다.

구조.

pGLO는 재조합 DNA 기술을 사용하여 결합된 세 개의 유전자로 구성되어 있습니다.그 예는 다음과 같습니다.

• Bla - β-락탐 계열 항생제(페니실린 계열 등)에 변형된 박테리아 내성을 부여하는 효소 베타-락타마아제를 코드화합니다.
• GFP의 발현을 조절하는 프로모터 영역인 araC(특히 GFP 유전자는 아라비노스가 존재하는 경우에만 발현된다)
• 녹색 형광 단백질인 GFP는 세포가 이런 종류의 단백질을 생산하면 녹색 빛을 낸다.

대부분의 다른 원형 플라스미드와 마찬가지로 pGLO 플라스미드는 복제가 시작되는 플라스미드의 영역인 복제의 기원(ori)을 포함합니다.pGLO 플라스미드는 알바라는 이름의 녹색 형광 토끼를 생산하기 위해 사용한 프랑스의 연구자들에 의해 유명해졌다.

대부분의 다른 플라스미드와 마찬가지로 pGLO의 다른 특징들은 선택 가능한 마커와 GFP 유전자의 끝에 위치한 MCS(다중 복제 부위)를 포함한다.플라스미드는 5371쌍의 염기쌍이다.슈퍼코일 형태에서는 4200~4500 ^[1][2][3]범위의 아가로스 겔에서 실행됩니다.

GFP의 검출

GFP 유전자는 1962년 시모무라^[4] 오사무와 그의 연구팀이 우산 밑에 푸른 빛의 고리가 있는 해파리 에쿠오레아 빅토리아를 연구하면서 처음 관찰됐다.시모무라 씨와 그의 팀은 단백질을 완전히 분석할 수 있을 만큼 모일 때까지 수천 마리의 해파리로부터 단백질 에이코린을 분리했다.시모무라가 푸른 빛을 발할 때 녹색으로 빛나는 소량의 GFP를 발견한 것은 아이코린의 연구를 통해서였다.GFP가 해파리의 에쿼린과 어떻게 작용하는지 성공적으로 발견한 후, 그는 그것을 다른 유기체의 생물발광을 연구하기 위해 따로 두었다.

1994년 Marty Chalfie와^[4] 그의 팀은 GFP 단백질을 발현하는 박테리아와 둥근 벌레를 성공적으로 만들 수 있었다.곧^[5] Roger Tsien과 그의 팀은 녹색뿐만 아니라 다양한 색을 방출할 수 있는 돌연변이 GFP를 만들 수 있었다.

세 명의 과학자들은 녹색 형광 단백질인 GFP의 발견과 개발로 2008년 노벨^[6] 화학상을 수상했다.

레퍼런스