다크 퀀처

다크 퀀처(dark quencher)는 형광체로부터 들뜸 어리버리rgy를 흡수하여 에너지를 열로 소멸시키는 물질입니다. 반면 전형적인 (형광) 퀀처는 이 에너지의 많은 부분을 ^[1]빛으로 다시 방출합니다.다크 퀀처는 분자생물학에서 형광체와 함께 사용된다.분자나 단백질과 같이 두 개가 가까이 있으면 불소 포자의 방출이 억제됩니다.이 효과는 분자 기하학과 운동을 연구하는 데 사용될 수 있다.

예를 들어 TaqMan 또는 침입자 분석, SNP 유전자형 분석 방법이 있습니다.예를 들어 줄기 밑부분에 불소 및 담금질을 가진 헤어핀 루프를 이용한다.특정 5' 꼬리를 가진 라벨이 없는 SNP 특이 PCR 프라이머(많은 것 중 하나)가 프로브되는 배열에 결합하고 Taq 중합효소는 SNP에 의존하는 특정 5' 말단을 갖는 배열을 확장한다(문제의 SNP 상류 다형성에 민감하지 않음).다음 실행에서는 그 꼬리를 보완하는 헤어핀 루프를 가진 프라이머가 연장된다.다음 실행에서는 상보적인 가닥의 연장에 의해 형광체와 담금질을 분리하는 헤어핀이 선형화된다.퀀처를 사용하는 대안으로 ^[2]두 가지 염료의 조합이 신호를 제공하는 FLET를 사용하는 것이 있습니다.

기능 모드

다크 퀀처는 천연 형광이 없는 염료이다.지난 몇 년 동안 퀀처는 일반적으로 리포터로서의 플루오레세인, 퀀처로서의 테트라메틸로다민(FAM/TAM 프로브)과 같은 두 번째 형광 염료였습니다.단, 퀀처 형광은 퀀처 스펙트럼과 리포터 형광 스펙트럼 사이의 중첩으로 인해 배경 소음을 증가시킬 수 있다.이러한 제한으로 인해 복잡한 데이터 분석 및 광학 필터를 사용해야 하는 경우가 많습니다.다크 퀀처는 방출 대역폭을 차지하지 않기 때문에 이 문제를 해결할 수 있습니다.게다가 다크 퀀처는 멀티플렉싱을 가능하게 합니다(여러 Reporter-quencher 프로브가 함께 사용되는 경우).

형광 염료는 빛을 흡수하여 염료를 들뜬 상태로 만들고, 빛(형광)을 방출하여 들뜬 상태에서 지반 상태로 돌아갑니다.리포터 - 퀀처 시스템에서는 (빛이 없는) 비방사성 염료가 에너지를 퀀처로 전달합니다.이렇게 하면 염료가 접지 상태로 돌아가고 담금질 들뜸 상태가 생성됩니다.그러면 담금질은 방사 붕괴(형광) 또는 비방사성(암소화)을 통해 지면 상태로 돌아갑니다.비방사성 또는 암흑 붕괴에서 에너지는 분자 진동(열)을 통해 방출됩니다.시료의 농도가 일반적으로 μM 이하일 경우 무방사선 붕괴로 인한 열이 너무 작아서 용액의 온도에 영향을 미치지 않는다.

다크 퀀처 예시

• Dabsyl(디메틸아조벤젠술폰산)은 녹색 스펙트럼에서 흡수되어 플루오레세인과 함께 자주 사용된다. (Dabsyl은 흡수가 거의 동일하지만, Sulfonyl 염화물이 있어 숙시미딜 에스테르 대신 보다 안정적인 결합체를 형성한다.)
• 블랙홀 담금질은 가시 스펙트럼 전체에 걸쳐 담금질할 수 있습니다.
• Qxl 퀀처는 가시 스펙트럼 전체에 걸쳐 있습니다.
• Iowa Black FQ는 스펙트럼의 녹색-노란색 부분을 흡수합니다.
• Iowa Black RQ는 스펙트럼의 주황색-빨간색 부분을 블록합니다.
• IRDye QC-1은 가시광선에서 근적외선 범위(500~900nm)^[3]까지 염료를 담금질한다.

레퍼런스

추가 정보

• J. Lakowicz, 형광분광원리, 제2판, 뉴욕 플레넘, 1999년.
• Johansson, M.K.; Cook, R.M. (2003). "Intramolecular Dimers: A New Design Strategy for Fluorescence-Quenched Probes". Chem. Eur. J. 9 (15): 3466–3471. doi:10.1002/chem.200304941. PMID 12898673.

외부 링크

• 인비트로겐 핸드북: QSY 염료.
• IRDye QC-1 유니버설 퀀처 (500~900 nm)