미분 추출

미분 추출(미분해석이라고도 함)은 서로 다른 두 종류의 세포에서 내용물을 섞지 않고 DNA를 추출할 수 있는 과정을 말한다.이 방법의 가장 일반적인 적용은 질 상피세포에서 DNA를 추출하고 성폭행 사건에서 정자세포를 추출해 피해자와 가해자의 DNA 프로파일을 파악하는 것이다.정자 세포가 이황화 결합에 의해 결합되는 프로토마인(히스톤이 아닌)을 이용해 DNA를 포장하는 것이 그 성공에 바탕을 두고 있다.양성자는 정자조아에서 DNA를 분리하여 상피세포에서 DNA를 추출하는 것보다 DNA 추출에 더 탄력적이다.

질/정형 표본에 정자 세포가 존재한다고(일반적으로 얼룩과 가벼운 현미경 검사를 통해) 판단한 후, 피험자의 상피 세포는 페놀/클로로폼 추출과 같은 표준 DNA 추출법에 의해 라이스 처리되며, 그 DNA는 정상적인 방법을 통해 추출된다.용액의 상피 DNA는 제거하여 저장하며, 정자세포의 DNA는 부착된 원자와 함께 침전된다.미분 추출은 DNA를 방출하기 위해 디티오트레이톨(DTT)이라는 화학물질을 사용하여 양성자의 유황 결합을 방해한다.일단 DNA가 프로토마인으로부터 분리되면 표준 DNA 추출법이 되기 쉽다.이렇게 하면 한 표본에서 두 개의 다른 DNA 분율이 생성되는데, 그것은 피해자와 가해자의 DNA 분율이다.

그러나 서술된 방법은 매우 노동집약적이고 시간이 많이 소요되어 검증되지 않은 강간키트가 쌓이게 되기 때문에 수행하기가 어렵다.미국에서만 약 500,000개의 강간 도구들이 있을 것으로 추산된다.^[1]Greenspoon 등은 로봇 자동화를 사용한 샘플 처리 효율과 처리량의 개선을 보고했다.^[2]그러나 저투과 샘플 양과 함께 구현하기 위한 관련 비용은 법의학 연구소에 비실용적일 수 있으며 정당화될 수 없다.^[3]

최근 최고 품질의 DNA 라이세트를 제공하기 위해 다단계 핵산 추출 절차가 도입되었다.^[4]자가 밀봉막은 DNA를 단계별로 분리하고 혼합 시료에서 분리할 수 있다.스핀 컬럼 시스템으로 구현되며 상피, 침 또는 혈액 대 정자와 같은 법의학 검체의 차등 추출과 관련된 DNA 추출 절차에 이상적으로 적합하다.산부인과 면봉뿐만 아니라 스테인드 샘플에 대한 간단하고 신뢰할 수 있는 추출 프로토콜은 종종 주장되는 미분 추출의 어려움(예: 여러 세척 단계를 통해 정자 알갱이를 잃는 것)을 극복한다.

또한 점진적인 완충 분리 때문에 미분 추출 과정이 시간과 노력의 가치가 있는지 여부를 조기에 적격으로 결정할 수 있다.성폭행 표본의 정액에 대한 면역학적 사전검사는 동일한 표본을 이용해 실시할 수 있다.

워크플로우

성폭행 증거 표본의 차등 투석 작업흐름이 표시된다.단계적 DNA 추출 과정의 모든 단계가 자세히 설명되어 있다.

우선 인간의 모든 단백질, 예를 들어 인간의 세메노겔린 항원은 선택적으로 격리되고 면역학적으로 분석되어 인간의 세민액이 존재하는지 신속하게 확인할 수 있다.이 테스트에서 양성 결과가 나오면 동일한 케이스워크 샘플이 추가로 처리된다.^[5]미분해석의 첫 번째 부분은 여성의 DNA를 얻기 위해 가벼운 조건에서 수행된다.상피 세포의 리세이트는 열 배양과 적당한 흔들림에도 기둥 안에 유지된다.원심분리 시 용액은 컬럼을 채취 튜브로 전달한다.DNA 리세이트는 추가적으로 정제되어 희생자의 자동 STR 프로필을 생성하는 데 사용된다.가해자의 신원을 확인할 수 있는 남성 DNA를 추가로 얻기 위해, 더 가혹한 용해 조건을 검체 운반이 필요 없는 동일한 필터 기둥에 적용하여 유착된 정자조아를 분해한다.DNA의 높은 수율 때문에 다운스트림 분석에 의한 DNA 프로파일의 성공 가능성이 크게 높아진다.이러한 간단한 처리는 이 수동 프로세스에서 시간 절약과 높은 처리량을 가능하게 하여 범죄 해결 비율을 개선하고 밀린 범죄 샘플의 분석을 가속화할 수 있다.

참조