PUC19

pUC19
pUC19의 벡터 맵

pUC19는 조아킴 메싱과 동료들이 만든 일련의 플라스미드 복제 벡터 중 하나이다.[1]pUC라는 명칭은 플라스미드 시리즈에 대한 초기 작업이 진행되었던 캘리포니아 대학의 약칭인 고전적인 "p" 접두사("plasmid"를 나타낸다.[2]그것은 반복되는 2중 가닥 DNA와 2686 기초 쌍 가지고 있다.[3]pUC19은 가장 널리 사용되는 벡터의 분자로 recombinants, 또는에 대한 외국인 DNA소개를 받은 세포를 쉽게 non-recombinants 식민지들의 성장이 언론에 색깔 차이에 따른 구별될 수 있다. pUC18 pUC19기도 하지만, 그 MCSregio 비슷하다.n이 역전되다.

구성 요소들

특히 대장균의 β-갈락토시다아제(lacZ) 유전자의 N단자 파편을 함유하고 있다.[4]다중 복제 사이트(MCS) 영역은 lacZ 유전자의 코돈 6-7로 분할되어 많은 제한적 내핵 제한 사이트를 제공한다.[5]pUC19는 β-갈락토시다아제 외에도 앰피실린을 분해하고 숙주에 대한 독성을 감소시켜 기능하는 β-락타마제 효소를 통해 앰피실린 저항 유전자(ampR)에 대한 인코딩도 한다.[6]

복제의 기원인 오리 사이트는 플라스미드 pMB1. pUC19는 작지만 높은 복사 번호를 가지고 있다.높은 카피 번호는 pMB1 오리의 rop 유전자가 부족하고 1점 돌연변이가 발생한 결과다.[7]β-갈락토시다아제에 대한 lacZ 유전자 코드.힌드어의 인식 사이트III, SphI, PstI, SalI, XbaI, BamHI, SmaI, KpnI, SacI, EcoRI 제한 효소는 벡터 M13mp19에서 파생되었다.[8]

함수

이 플라스미드는 "변환"이라고 불리는 과정에 의해 박테리아 세포에 도입되는데, 여기서 증식하고 자신을 표현할 수 있다.그러나 MCS와 여러 제약 사이트가 존재하기 때문에 MCS 지역에서 외국산 DNA를 삽입하여 그 안에 도입할 수 있다.플라스미드를 섭취한 세포는 앰피실린으로 미디어에서 배양함으로써 플라스미드를 섭취하지 않은 세포와 구별할 수 있다.앰피실린 저항성(ampR) 유전자를 함유한 플라스미드를 가진 세포만이 살아남을 것이다.더욱이 관심 유전자를 가진 플라스미드를 포함하는 변환된 세포는 IPTG와 X-gal로 보완된 한천 미디어에 그들이 만드는 군집의 색상을 보는 것만으로도 플라스미드를 가진 세포와 구별할 수 있다.재조합은 흰색인 반면, 비조합은 파란색이다.

메커니즘

재조합세포 선별을 위한 분자 메커니즘의 도식적 표현

IPTG에 의해 합성을 유도할 수 있는 lac Z 파편은 호스트 염색체(E. coly JM109, DH5α, XL1-Blue 균주의 mutation lacZDM15)에 의해 인코딩된 β-갈락토시다아제 효소의 결함 형태로 알렐릭 내 보완이 가능하다.[9]성장배지에서 IPTG가 존재하는 곳에서 박테리아는 효소의 두 조각 모두를 합성한다.두 파편 모두 X-gal(5-브로모-4-클로로-3-indolyl- 베타-D-galactopyranoside)을 하이드로 합성할 수 있으며, 이를 보완하는 매체에서 재배하면 푸른 군락을 형성할 수 있다.

lac Z유전자 내에 위치한 MCS에 외래 DNA를 삽입하면 베타갈락토시다아제의 N단자 파편에서 이 유전자의 삽입불활성화를 유발하고 알렐릭 내 보완을 폐기한다.따라서 MCS에서 재조합성 플라스미드를 운반하는 박테리아는 X-gal을 가수분해할 수 없어 백색 군락을 발생시킬 수 있는데, 이는 배양 매체에서 푸른색을 띠는 비재조합성 세포와 구별할 수 있다.[10]

따라서 사용되는 매체는 앰피실린, IPTG, X-gal을 포함해야 한다.

연구에 사용하다

pUC19는 연구와 산업에서 복제 벡터로 광범위하게 사용되기 때문에 연구에서는 모델 플라스미드로 자주 사용된다.[11]예를 들어, 자연적으로 초코팅된 상태에 대한 생물물리학적 연구는 그것의 회전 반경을 65.6 nm, 스톡스 반경을 43.6 nm로 결정했다.

참고 항목

참조

  1. ^ Yanisch-Perron, C.; Vieira, J.; Messing, J. (1985). "Improved M13 phage cloning vectors and host strains: Nucleotide sequences of the M13mp18 and pUC19 vectors". Gene. 33 (1): 103–119. doi:10.1016/0378-1119(85)90120-9. PMID 2985470.
  2. ^ Vieira, J.; Messing, J. (1982). "The pUC plasmids, an M13mp7-derived system for insertion mutagenesis and sequencing with synthetic universal primers". Gene. 19 (3): 259–268. doi:10.1016/0378-1119(82)90015-4. PMID 6295879.
  3. ^ pUC19 설명 및 제한 맵
  4. ^ Louro, Ricardo O.; Crichton, Robert R. (2013). Practical approaches to biological inorganic chemistry. Amsterdam, Oxford: Elsevier. p. 279. ISBN 9780444563590. Retrieved April 7, 2014.
  5. ^ Louro, Ricardo O.; Crichton, Robert R. (2013). Practical approaches to biological inorganic chemistry. Amsterdam, Oxford: Elsevier. p. 279. ISBN 9780444563590. Retrieved April 7, 2014.
  6. ^ Wang, Nam Sun. "Summary of Sites on pUC19". Department of Chemical & Biomolecular Engineering University of Maryland. Retrieved 27 January 2017.
  7. ^ Saha; et al. (2004). "A naturally occurring point mutation in the 13-mer R repeat affects the oriC function of the large chromosome of Vibrio cholerae O1 classical biotype". Archives of Microbiology. 182 (5): 421–427. doi:10.1007/s00203-004-0708-y. PMID 15375645. S2CID 28286917.
  8. ^ Mooreland; et al. (2013). Advanced Biomolecular Genetics. Kleiske Publishing. pp. 889–932.
  9. ^ Louro, Ricardo O.; Crichton, Robert R. (2013). Practical approaches to biological inorganic chemistry. Amsterdam, Oxford: Elsevier. p. 279. ISBN 9780444563590. Retrieved April 7, 2014.
  10. ^ Pasternak, Jack J. (2005). An Introduction to Human Molecular Genetics, Second Edition. Wiley-IEEE. p. 117. ISBN 978-0-471-71917-5.
  11. ^ Störkle, Dominic (5 September 2007). "Complex Formation of DNA with Oppositely Charged Polyelectrolytes of Different Chain Topology: Cylindrical Brushes and Dendrimers". Macromolecules. 40 (22): 7998–8006. Bibcode:2007MaMol..40.7998S. doi:10.1021/ma0711689.

외부 링크